摘要
背景：脑出血（intracerebralhemorrhage,ICH）是急性脑血管疾病中致残率和死亡率较高的疾病，也是成人永久性残疾的常见原因之一。ICH后二次脑损伤的主要原因是血脑屏障（Bloodbrainbarrier，BBB）功能障碍引起的血管源性脑水肿,与血脑屏障关系密切的牙本质基质蛋白1（Dentinmatrixprotein1，DMP1）在ICH中的作用目前尚不明确。 目的：观察DMP1在昆明鼠脑中的表达分布、细胞定位，以及在ICH后脑组织中的表达变化以初步探讨DMP1在ICH后对小鼠继发性脑损伤的作用及其可能机制。 方法：从健康成年雄性昆明鼠中随机选取小鼠作为实验对象，共设计6个实验组别，分别为假手术组(Sham)、ICH后6h组、ICH后12h组、ICH后24h组、ICH后72h组、ICH后7d组(n=6),ICH组采用向基底节区注入自体血建立ICH模型，等量生理盐水注入Sham组。采用免疫荧光染色（immunofluorescence，IF）检测DMP1在昆明鼠脑内的表达分布以及细胞定位；在ICH后设置的相应时间点将各组小鼠处死并收集脑组织，采用免疫印迹（Westernblot，WB）检测不同时间点DMP1蛋白含量表达变化；应用伊文斯蓝（Evansblue，EB）实验检测各个时间点血脑屏障的破坏情况；根据以上的实验结果选取ICH后24h作为以下实验的标准点。在ICH前72h,经侧脑室注射（intracerebroventricular,i.c.v）DMP1小干扰RNA（DMP1smallinterferingRNA,DMP1siRNA）；采用HE染色和Nissl染色观察小鼠脑组织形态学变化；采用改良Garcia评分和cornerturntest评估小鼠的神经功能学评分，采用干湿法检测大脑脑含水量;采用EB渗透实验检测血脑屏障通透性；采用透射电镜（transmissionelectronmicroscopy,TEM）检测星形胶质细胞肿胀程度和紧密连接闭合情况；采用WB检测闭锁连接蛋白-1（zonulaoccludens-1,ZO-1）、闭锁蛋白（occludin）、基质金属蛋白酶9（matrixmetalloprotein9,MMP9）蛋白表达情况。 结果：DMP1在正常昆明鼠脑中广泛表达，包括大脑皮质、海马、内囊、胼胝体、丘脑、外囊、尾状核，并且与神经元标记物(Neuron-specificnuclearprotein,NeuN)、星形胶质细胞标记物(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)和血管内皮细胞标记物(vonWillebrandfactor,vWF)共定位。DMP1蛋白含量在ICH后6h表达增加，并且在ICH后24h达到最高(Plt;0.05)。在小鼠ICH后，神经功能缺损评分显著降低；病理改变明显，脑组织血肿周围水肿明显，细胞排列疏松。DMP1siRNA处理有效地减轻ICH后血脑屏障破坏、脑水肿并提高神经功能的评分。此外，在ICH模型中，ZO-1和occludin的蛋白含量表达减少，MMP-9的蛋白含量表达上调。DMP1siRNA处理可以逆转ZO-1，occludin和MMP-9的蛋白含量表达。 结论：DMP1在小鼠脑中广泛分布，并且在脑出血后表达增加，与ICH后血脑屏障破坏有关。DMP1siRNA处理减轻ICH后继发性脑损伤。在ICH后BBB功能障碍的发生发展中,DMP1的作用可能与MMP-9的激活密切相关。
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