摘要
目的 1．研究动脉粥样硬化模型小鼠血脂、炎症因子及脑微血管通透性的改变。 2.探索Ghrelin对动脉粥样硬化小鼠血脂、炎症因子及脑微血管通透性的影响及可能的机制。 3.探讨Ghrelin对ox-LDL培养下脑微血管周细胞的影响及p38MAPK-JNK信号通路在其中的调节机制。 方法 1.建立对照组（Control）、动脉粥样硬化组（AS）、Ghrelin干预组（Ghrelin）（共3组）小鼠模型，对照组小鼠给予普通食物，AS组及Ghrelin组给予高脂食物喂养12周，取主动脉根部组织切片HE及油红染色验证小鼠模型构建成功，第13周转为普通食物喂养，Ghrelin组另给予腹腔注射Ghrelin（100ug/kg/次，2次/日）4周。 2.ELISA及RT-qPCR检测血清炎症因子；ELISA检测血清中ox-LDL水平；Evanblue检测脑微血管的渗透性；HE染色观察脑微血管的形态、是否渗漏；CD31+PDGFR-β免疫荧光双标染色检测脑微血管周细胞的分布及数量；透射电镜观察小鼠脑微血管的结构；免疫印迹法（Westernblot）检测小鼠脑组织PDGFR-β、p38MAPK-JNK的表达变化。 3.体外培养小鼠原代脑微血管周细胞，分别加入ox-LDL，Ghrelin和p38/JNK的调节剂Hesperetin处理；通过CCK-8、WB实验确定ox-LDL、Ghrelin、Hesperetin的最佳给药浓度；ELISA检测细胞培养上清中炎症因子含量，RT-qPCR检测细胞内炎症因子的表达；TUNEL检测细胞凋亡情况；WB检测p38MAPK-JNK、Bcl-2/Bax/CleavedCaspase-3的表达情况。 结果 1.喂养12周后，Control组小鼠无动脉粥样硬化，AS组小鼠明显动脉粥样硬化，说明动脉粥样硬化模型构建成功；与AS组小鼠比较，Ghrelin组小鼠的血清ox-LDL及炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α含量明显下调。 2.AS组小鼠BBB渗出的Evansblue染料比Control组小鼠明显增多，Ghrelin治疗组与未治疗的AS小鼠相比，BBB对Evansblue渗漏显著减少；此外，在透射电镜下观察到皮质区BBB紧密连接的超微结构：AS模型小鼠脑微血管中周细胞肿胀、形态异常，而Ghrelin干预能部分恢复周细胞的形态。 3.IF双标染色显示AS模型小鼠脑微血管（CD31阳性）中周细胞（PDGFR-β阳性）数量减少，而Ghrelin干预能部分恢复周细胞的数量；WB结果表明AS模型小鼠脑组织中PDGFR-β（周细胞的标志物）下调，Ghrelin干预能上调PDGFR-β的表达；另外，AS模型小鼠脑组织中p-p38及p-JNK明显上调，而Ghrelin干预组脑组织中p-p38及p-JNK下调，说明脑微血管周细胞的减少可能是通过p38MAPK-JNK信号所介导。 4.ELISA检测结果表明：ox-LDL组周细胞培养上清中炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α含量明显增高，Ghrelin干预能显著下调周细胞培养上清中炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α的水平；RT-qPCR结果也表明Ghrelin干预能显著下调周细胞内炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α的水平；Tunel检测结果表明，ox-LDL组周细胞凋亡增多，Ghrelin干预能减少周细胞凋亡；Western-blot检测结果提示，Ghrelin干预能下调周细胞p38MAPK-JNK、Bax/CleavedCaspase-3表达，上调Bcl-2表达；给予Hesperetin（p38MAPK-JNK调节剂）处理后，能拮抗Ghrelin对周细胞炎症因子的调控、凋亡的调控及p38MAPK-JNK的抑制作用。 结论 1.动脉粥样硬化小鼠血清炎症因子高表达，血脂水平升高，导致脑微血管周细胞数量减少、形态异常，脑微血管渗漏。 2.Ghrelin下调动脉粥样硬化小鼠血清炎症因子及血脂水平，部分恢复周细胞的数量及形态，改善脑微血管的渗漏。 3.Ghrelin通过p38MAPK-JNK途径下调ox-LDL环境中周细胞的炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α水平，减少周细胞的凋亡。
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