摘要
目的：为了解决原位肿瘤切除后易于复发这一关键科学问题，我们通过构建三维复合水凝胶培养M1型巨噬细胞提取其脱细胞基质用来抑制肿瘤复发。方法：1、三维复合水凝胶制备及性能表征实验：降解实验、溶胀实验、微观形貌、生物相容性实验。CCK8实验检测细胞毒性；流式实验检测细胞极性。2、脱细胞基质制备。3、体外研究脱细胞基质抑制肿瘤：CCK-8实验检测肿瘤抑制效果;免疫印迹试验（WesternBlot）检测活化的Caspase3和诱导型一氧化氮合酶（iNOS)的表达水平;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测M1和M2型巨噬细胞极性标志物;酶联免疫吸附实验（ELISA）检测TNFα分泌量；一氧化氮(NO)检测试剂盒检测NO分泌量。4、体内研究脱细胞基质抑制肿瘤复发：肿瘤体积检测和小动物成像实验证实脱细胞基质水凝胶抑制复发肿瘤的效果；Ki-67免疫组化染色检测细胞增殖；Hamp;E染色实验检测细胞毒性和肿瘤肺转移；流式实验检测免疫细胞类型和巨噬细胞类型。结果：1、三维复合水凝胶成功构建。三维复合水凝胶的性能表征实验表明10mg/mL浓度最适于培养M1型巨噬细胞。2、脱细胞基质提取成功。3、体外脱细胞基质抑制肿瘤细胞增殖。脱细胞基质能维持M1型巨噬细胞极性，减弱M2型巨噬细胞极性，同时增强M2型巨噬细胞分泌TNFα和NO。当M1和M2型巨噬细胞与肿瘤细胞共培养时，脱细胞基质维持M1型巨噬细胞极性，逆转M2型巨噬细胞极性。4、体内脱细胞基质显著抑制肿瘤复发。脱细胞基质抑瘤效果是通过激活小鼠自身免疫和逆转肿瘤相关巨噬细胞来实现的。脱细胞基质抑制肿瘤增殖。另外脱细胞基质对小鼠无毒副作用，抑制小鼠肿瘤肺转移。结论：综上所述，我们成功提取M1型巨噬细胞的脱细胞基质，通过体内外实验证实，该基质可维持M1型巨噬细胞极性，减弱甚至逆转M2型巨噬细胞，上调CD8+细胞数量，从而激活自体免疫应答，抑制肿瘤复发。 细胞的迁移和侵袭行为在组织再生中起着至关重要的作用。在皮肤修复过程中，调节成纤维细胞的定向炎症反应对于有效的伤口愈合至关重要。在这项研究中，我们提出了基于微流控的三维(3D)微生理系统的设计，以及它在不同激活状态的巨噬细胞诱导下影响成纤维细胞的迁移和侵袭。该微流控装置在1mm微通道的两侧有两个腔室，提供定向诱导和足够的宽度用于长期观察。实验细胞可接种基质胶或不接种基质胶，根据实验设置在2D或3D微环境中培养。该微通道允许任何类型的基质填充，并可根据需要进行连续监测。此外，它还具有可检索性、动态观测、三维环境仿真。以不同极化状态下RAW264.7巨噬细胞调控NIH3T3的迁移和侵袭模式为例。迁移实验的结果与增殖和基因表达实验的结果一致，验证了我们的装置完全能模拟体内微环境并呈现细胞运动的行为。
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