摘要
目的研究实验组叶黄素培养过的人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞与对照组未添加叶黄素培养的细胞，在增殖、迁移能力方面的差异，观察总结叶黄素对乳腺癌细胞功能的影响，并进一步探究其作用机制。通过查找文献我们发现，叶黄素可干扰肿瘤细胞的脂质代谢过程。在分子生物学层面，通过测定实验组及对照组细胞中脂质代谢相关蛋白SOAT-1，SREBP-1，LDLR，FASN的表达情况，来确定叶黄素对细胞脂质代谢的影响。同时，通过免疫荧光实验进一步验证RT-qPCR及免疫蛋白印迹技术实验结果。方法将细胞培养于培养瓶中，传代，选择同一培养瓶中的第三代细胞随机分为四个组，其中对照组中乳腺癌细胞株，采用不含叶黄素的培养液进行培养，实验组为三组，叶黄素处理浓度分别为200μM、400μM、800μM。通过CCK8检测吸光度值的方法，分别采集对照组及实验组细胞培养0、12、24、48、72h的实验数据并绘制不同组细胞的细胞数曲线图，通过观察曲线图，选择对细胞影响较小的浓度，即叶黄素药物浓度为200μM为实验组药物浓度，因此在后续实验中，我们选取200μM浓度含有叶黄素的培养液处理实验组细胞。克隆形成实验比较实验组与对照组细胞生长情况，与CCK-8实验或为补充。为了观察叶黄素（200μM）对细胞迁移能力的影响，我们进行了Trans-well实验。RT-qPCR及免疫蛋白印迹技术检测SOAT-1，SREBP-1，LDLR，FASN表达情况，得到叶黄素（200μM）对乳腺癌细胞脂质代谢的干扰情况。免疫荧光实验进一步验证RT-qPCR及免疫蛋白印迹实验结果。在进行体外细胞实验的同时，通过体外乳腺癌细胞移植瘤方式，将对照组231细胞与实验组231细胞注入斑马鱼尾部，观察两组体内移植瘤在体发展状况。结果实验组与对照组细胞增殖和迁移能力具有显著差异，并且差异有统计学意义（p＜0.05），叶黄素能够抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231，MCF-7细胞增殖和迁移能力。另外，在一定程度上增加叶黄素浓度，细胞增殖能力减弱相对更明显。在体外实验中，将叶黄素处理过的231细胞注射入斑马鱼体内后，相对于对照组而言，肿瘤团块体积更小，这证明在体和体外实验结果一致，叶黄素具有抑制乳腺癌生长的能力。通过Trans-well实验可以发现，实验组与对照组细胞迁移能力也有明显差异，且差异有统计学意义（p＜0.05），主要表现为经过叶黄素处理过后，细胞迁移能力明显减弱。培养并采集对照组细胞，同时，我们继续选用叶黄素浓度为200μM的培养液培养并收集实验组细胞，通过PCR、WB、免疫荧光等实验，我们发现与脂质代谢相关的分子SOAT-1，SREBP-1，LDLR，FASN的表达量明显下调。结论叶黄素对乳腺癌细胞增殖和迁移过程具有抑制作用，其作用机制通过干扰细胞脂代谢途径实现。
NETL