摘要
第一部分：Ⅰ型干扰素通路在胆道闭锁发病机制中的作用 【目的】 围产期病毒感染诱发肝脏免疫失衡是胆道闭锁（BA）发病原因之一，但是Ⅰ型干扰素通路在胆道闭锁发生发展中的作用不清。在胆道闭锁的发病机制中，分泌干扰素-γ的CD4T和CD8T在汇管区和胆管上皮沉积是其中很重要的因素之一。程序性死亡1（PD-1）信号抑制T细胞功能。然而，PD-1是否调节BA中T细胞的功能尚不清楚。本研究探索Ⅰ型干扰素通路在BA发病机制中的作用、阻断Ⅰ型干扰素通路对BA的治疗作用以及PD-1在胆道闭锁疾疾病进展中的主要作用。。 【方法】 通过建立BA疾病队列，收集患者术中的外周血以及肝脏活检标本，并通过流式细胞术分析和对比BA患者和对照肝脏和外周血中PD-1在CD4和CD8T细胞的表达，检测PD-1+CD4/CD8T细胞比例与肝功能指标的关系。通过恒河猴轮状病毒（RRV）诱导建立胆道闭锁模型，将新生的Balb/c小鼠随机分为三组：Control组：出生12-24小时内腹腔肝下缘注射PBS；RRV组:出生12-24小时内腹腔肝下缘注射RRV；RRV+anti-IFNAR1组：出生12-24小时内腹腔肝下缘注射RRV,在第18小时，第5天，腹腔注射IFNAR1中和抗体。观察各组小鼠在不同时间点的体重、表型、病理数据变化。同时通过Masson染色，观察肝脏纤维化差异；通过HE染色，评价肝脏淋巴细胞浸润情况。利用流式细胞仪收集并分析各个组小鼠的肝脏以及脾脏的T细胞，B细胞，髓系细胞的各个亚群的比例和功能的变化。通过实时荧光定量PCR分析Ⅰ型干扰素下游分子的转录水平变化。用anti-PD-1抗体阻断PD-1的作用，检测BA小鼠生存率、黄疸率，组织学染色检测肝脏组织淋巴细胞的浸润、纤维化以及坏死灶，检测小鼠肝脏功能指标，肝脏免疫细胞亚群和细胞因子的产生进行对比和分析。 【结果】 1.阻断Ⅰ型干扰素通路降低胆道闭锁模型小鼠黄疸率； 2.阻断Ⅰ型干扰素通路抑制胆道闭锁模型小鼠T细胞功能； 3.阻断Ⅰ型干扰素通路恢复RRV感染所致的小鼠肝脏中B细胞发育异常； 4.阻断Ⅰ型干扰素通路恢复胆道闭锁模型小鼠的髓系细胞清除病原体功能。 5.与对照疾病CC组相比，BA患者肝脏CD4和CD8T细胞中PD-1表达显著上调； 6.肝组织中IFN-γ浓度与外周血和肝脏中PD-1+CD4/CD8T细胞比例呈负相关； 7.在BA小鼠模型中阻断PD-1促进CD4T和CD8T细胞中IFN-γ的表达，肝脏损伤加重。 【结论】 阻断IFN-Ⅰ信号通路通过调节T细胞，B细胞以及髓系细胞的数量和功能减轻胆道闭锁模型小鼠的肝损伤，阻断IFN-Ⅰ信号通路是胆道闭锁早期治疗的关键策略。BA患者外周血/肝脏中PD-1+CD4T/CD8T比例的升高，可能通过抑制T细胞产生IFN-γ，对胆道闭锁患儿起到保护作用,增加PD-1的表达可能可以成为是胆道闭锁的一种新的治疗策略。
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