摘要
背景：爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)是最早被发现有致癌能力的DNA病毒，全世界大约有90%的成年人感染EBV，并且其也是首个被发现可以编码miRNA的病毒。至今为止，人们发现EBV共编码生成25种miRNA前体和44种成熟的miRNA，其中4种miRNA由EBV基因组中的BHRF1区编码，而剩下的40种均由BART区编码。miR-BARTs在鼻咽癌和EBV相关胃癌(EBVassociatedgastriccancer,EBVaGC)中呈高表达，并且在转录后水平参与调控多种基因的表达。SNAIL是一种保守的具有锌指结构的转录因子，SNAIL家族有三个成员分别是SNAI1(SNAIL)、SNAI2(SLUG)和SNAI3(SMUC)。SNAIL是上皮间质转化(Epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的标志物，在肿瘤形成中起着关键作用，SNAIL过表达可以通过抑制宿主的免疫监视能力促进肿瘤的转移及复发。 目的：探讨在EBVaGC和EBV阴性胃癌(EBVnegativegastriccancer,EBVnGC)中SNAIL的表达情况，明确EBV-miR-BART12对SNAIL表达的调控作用，为阐明EBVaGC的发生发展提供理论依据。 材料和方法：①实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR,qRT-PCR)和WesternBlot检测EBVaGC细胞系(GT38、GT39、SNU719)及EBVnGC细胞系(SGC7901、AGS、BGC823)中SNAIL基因mRNA和蛋白的表达情况。②免疫荧光检测SNAIL在细胞内的定位情况。③分别在EBVaGC和EBVnGC细胞系中转染EBV-miR-BART12的抑制物和模拟物，随后提取细胞总蛋白并通过WesternBlot检测SNAIL蛋白表达的变化。④双荧光素酶实验验证SNAIL是否为EBV-miR-BART12的靶基因。⑤Transwell和CCK8实验检测EBV-miR-BART12及SANIL小干扰RNA(siSNAIL)对胃癌细胞的迁移和增殖的影响；流式细胞术分析EBV-miR-BART12及siSNAIL对胃癌细胞周期或凋亡的影响。⑤放线菌酮(Cycloheximide,CHX)实验检测SNAIL蛋白降解情况。 结果：①qRT-PCR实验结果表明，在EBVaGC细胞系中SNAIL的转录水平明显低于EBVnGC细胞系；WesternBlot实验结果表明，在EBVaGC细胞系中SNAIL蛋白表达明显下调。②在EBVaGC细胞系中SNAIL蛋白主要定位于细胞质，且荧光强度明显弱于EBVnGC细胞系。③在EBVaGC细胞系GT39和SNU719中转染EBV-miR-BART12抑制物可上调SNAIL蛋白表达，在EBVnGC细胞系SGC7901和BGC823中EBV-miR-BART12模拟物可明显抑制SNAIL蛋白表达。④双荧光素酶实验结果表明，EBV-miR-BART12可直接靶向结合SNAIL编码基因的3''-UTR区域。⑤CCK8和Transwell实验结果表明EBV-miR-BART12模拟物可抑制胃癌细胞的增殖和迁移。⑥通过转染siRNA下调SNAIL蛋白表达，发现siSNAIL可以明显抑制胃癌细胞的迁移与增殖能力。⑦CHX实验结果显示EBV-miR-BART12模拟物可促进SNAIL蛋白的降解。⑧WesternBlot结果显示,EBV-miR-BART12抑制NF-κB信号通路。 结论：SNAIL蛋白在EBVaGC细胞系中明显下调，EBV-miR-BART12可靶向结合于SNAIL的3''-UTR区域进而抑制SNAIL蛋白的表达。另外，EBV-miR-BART12可促进SNAIL蛋白降解，抑制胃癌细胞的增殖、迁移能力及EMT过程。
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