摘要
目的：1、观察不同浓度高糖培养对人视网膜色素上皮（hRPE）细胞的影响。2、观察核仁小分子RNA宿主基因1（SNHG1）在高糖培养的hRPE细胞中的表达变化，以及在高糖诱导的hRPE细胞上皮间质转化（EMT）及炎症中的作用。 方法：1、观察不同浓度高糖培养对hRPE细胞的影响。ARPE-19细胞分为（1）正常组：5.5mM葡萄糖培养48h（2）30mM高渗组：30.0mM高渗培养基培养48h（3）30mM高糖组：30.0mM葡萄糖培养48h（4）60mM高渗组：60.0mM高渗培养基培养48h（5）60mM高糖组：60.0mM葡萄糖培养48h。RT-PCR检测上皮标志物E-钙粘蛋白（E-cadhrein）、紧密连接蛋白（ZO-1）的表达水平以及间质标志物波形蛋白（Vimentin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA)的表达水平；CCK8法检测各组细胞的增殖活力。 2、SNHG1在高糖培养的hRPE细胞中的表达。 60mM高糖分别刺激ARPE-19细胞0h、12h、24h、48h、72h，RT-PCR检测SNHG1的表达变化。 3、SNHG1对高糖诱导的hRPE细胞EMT及炎症的影响 ARPE-19细胞分为（1）正常对照组：5.5mM葡萄糖培养48h；（2）高渗对照组：渗透压60.0mM高渗培养基培养48h；（3）高糖干预组：60.0mM高糖培养48h；（4）si-NC组：将si-conSNHG1转染至细胞后，60.0mM高糖培养48h；（5）siSNHG1组：将si-SNHG1转染至细胞后，60.0mM高糖培养48h。RT-PCR检测各组细胞SNHG1的表达以及E-cadhrein、ZO-1、Vimentin、α-SMA的表达；CCK-8法检测各组细胞的增殖活力；细胞划痕实验检测各组细胞迁移面积；AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术检测各组细胞的凋亡率；ELASA法检测各组细胞IL-6、IL-1β的蛋白表达。 结果：1、不同浓度葡萄糖培养对hRPE细胞EMT的影响 RT-PCR结果示：30mM及60mM高糖组细胞中E-cadhrein、ZO-1的表达显著低于正常组，Vimentin、α-SMA的表达显著高于正常组（P＜0.05）。60mM高糖组中E-cadhrein、Z0-1表达低于30mM高糖组，Vimentin、α-SMA的表达高于30mM高糖组（P＜0.05）。CCK8实验结果示：30mM高糖组细胞增殖能力与正常组相比无显著差异(P＞0.05)，60mM高糖组细胞增殖能力显著高于正常组及30mM高糖组（P＜0.05）。 2、SNHG1在高糖培养的hRPE细胞中的表达 SNHG1在60mM高糖培养条件下呈时间依赖性升高，48h达到最高。 3、SNHG1对高糖诱导的hRPE细胞EMT及炎症的影响 RT-PCR结果显示：高糖干预组细胞中E-cadhrein及ZO-1表达量均低于对照组，Vimentin及α-SMA表达量均高于对照组（P＜0.05）；Si-SNHG1组E-cadhrein及ZO-1均高于si-NC组，Vimentin及α-SMA均低于si-NC组（P＜0.05）。细胞划痕实验显示：高糖干预组细胞48h迁移面积显著大于对照组(P＜0.05)，si-SNHG1组细胞48h迁移面积显著小于Si-NC组（P＜0.05）。CCK-8实验结果显示：高糖干预组细胞较对照组增殖活力高(P＜0.05)，Si-SNHG1组细胞较Si-NC组增殖活力低（P＜0.05）。流式细胞术结果显示：高糖干预组细胞凋亡率显著小于对照组(P＜0.05)，si-SNHG1组细胞凋亡率显著高于Si-NC组（P＜0.05）。ELASA结果示：高糖干预组细胞中IL-6、IL-1β均高于对照组（P＜0.05）。si-SNHG1组细胞中IL-6、IL-1β均低于si-NC组（P＜0.05)。 结论：1、高糖培养可诱导hRPE细胞发生上皮间质转化。 2、SNHG1在高糖培养的hRPE细胞中呈时间依赖性表达升高，并参与hRPE细胞的上皮间质转化和炎症过程。 3、SNHG1通过促进上皮间质转化促进hRPE细胞的增殖、迁移并抑制其凋亡。
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