摘要
目的：通过卵白蛋白（OVA）制备小鼠过敏性哮喘模型，观察加味过敏煎治疗过敏性哮喘的药效作用，并进一步探讨其初步分子机制及作用靶点。 方法：将60只4周龄SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、地塞米松阳性对照组（1.25mg·kg-1）、加味过敏煎高、中、低剂量组（分别含生药2.72g/ml、1.36g/ml、0.68g/ml）6组，每组10只。使用OVA致敏和激发，制备小鼠过敏性哮喘模型。 1、加味过敏煎治疗过敏性哮喘的药效学研究：观察激发阶段小鼠的行为学表现；支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞分类计数；苏木精－伊红染色观察肺组织病理切片炎性细胞浸润情况。 2、加味过敏煎治疗过敏性哮喘的免疫分子机制研究：采用免疫组化法（IHC）检测小鼠肺组织中信号转导子和转录激活子4、6（STAT4、STAT6）的表达及组织定位；采用免疫荧光法（IF）检测小鼠肺组织中细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞（EOS）的凋亡情况。 结果：1、加味过敏煎治疗过敏性哮喘的药效学研究：与模型组比较，激发阶段加味过敏煎高剂量组小鼠发作表现明显减轻；加味过敏煎能明显减少BALF中EOS比例（P＜0.05）；加味过敏煎各剂量组均可不同程度的改善肺组织的病理学改变，减轻气道炎症（P＜0.01~0.05）。 2、加味过敏煎对Janus激酶/信号转导子及转录激活子（JAK-STAT）信号通路中STAT4、STAT6影响的研究：IHC结果显示：与模型组比较，加味过敏煎高、中剂量组小鼠肺组织中STAT4蛋白含量显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，加味过敏煎高剂量组小鼠肺组织中STAT6蛋白含量显著降低（P＜0.05）。 3、加味过敏煎对哮喘小鼠肺组织EOS凋亡影响的研究：IF结果显示：与模型组比较，加味过敏煎高剂量组小鼠肺组织Bax蛋白高表达（P＜0.05），加味过敏煎高、中剂量组小鼠肺组织Bcl-2蛋白低表达（P＜0.01），加味过敏煎高剂量组小鼠肺组织Bcl-2/Bax比值降低（P＜0.05）；TUNEL结果显示：与模型组比较，加味过敏煎高、中剂量组小鼠肺组织EOS凋亡率升高（P＜0.01）。 结论：1、加味过敏煎可改善激发阶段哮喘小鼠的发作表现，可减少哮喘小鼠BALF中EOS浸润，改善肺组织病理学改变，减轻气道炎症，进一步证实了加味过敏煎具有平喘的药效作用。 2、加味过敏煎治疗过敏性哮喘的免疫机制可能是：①调控JAK-STAT转导通路中核转录因子STAT4、STAT6的表达；②促进EOS凋亡：上调促凋亡因子Bax的表达和下调凋亡抑制因子Bcl-2的表达。
NETL