摘要
目的：高血压是一种多种因素综合的慢性疾病，其发病过程中伴随低度炎症性反应。以经典高血压动物模型自发性高血压大鼠（SpontaneouslyHypertensiveRat,SHR）为研究载体，采用传统药理学、分子生物学等评价方法，从血流动力学、行为学、宏观表征、微观理化和细胞学等多方面多角度多层次的评价芒果苷的药效；通过观察SHR外周血和肾脏T淋巴细胞亚群的比例变化和炎症因子白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、IL-6、IL-10、γ-干扰素（Interferon-γ，IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-alpha，TNF-α）水平表达的影响，探讨芒果苷对高血压T淋巴细胞亚群和炎症相关因子的变化以及细胞免疫调节的作用机制，为芒果苷抗高血压病提供科学理论依据。根据细胞学的方法，辨别芒果苷的寒热药性有进一步的认识。 方法：将40只健康的10周龄SHR大鼠随机分为5组：模型组、苯那普利组（10mg·kg－1·d－1）、芒果苷低剂量组（25mg·kg－1·d－1）、芒果苷中剂量组（50mg·kg－1·d－1）、芒果苷高剂量组（100mg·kg－1·d－1），每组8只；另设8只同龄的WistarKyoto大鼠（WKY）大鼠作为正常对照组，每天给药10ml/kg连续灌胃，灌胃给药8周后停药，取材前禁食不禁水12h。 1.应用无创尾动脉法检测各组大鼠的血压。每两周测一次血压；并且每周称量一次大鼠的体质量； 2.应用流式细胞术检测苯那普利，芒果苷低、中、高剂量对自发性高血压大鼠外周血T淋巴细胞的影响。按照裂红法处理大鼠SHR和WKY的外周血，提取T淋巴细胞。用流式细胞仪进行检测，使用FCSexpress软件获取并分析数据，测定样本中的总T淋巴细胞（CD3+）、T辅助淋巴细胞（CD3+CD4+）、T抑制淋巴细胞（CD3+CD8+）以及CD4+/CD8+的比值； 3.应用流式细胞术检测苯那普利，芒果苷低、中、高剂量对肾组织T淋巴细胞的影响。通过研磨法处理大鼠肾脏组织，并提取T淋巴细胞。用流式细胞仪进行检测，测定样本中的总T淋巴细胞（CD3+）、T辅助淋巴细胞（CD3+CD4+）、T抑制淋巴细胞（CD3+CD8+）以及CD4+/CD8+的比值； 4.应用酶联免疫分析法（ELISA）法检测各组大鼠血清IL-6、IL-10、TNF-α的水平含量。根据试剂盒说明书检测其OD值； 5.应用ELISA法检测各组大鼠肾匀浆IL-4、IFN-γ的水平含量。根据试剂盒说明书检测其OD值； 6.每天观察大鼠的行为学，排便情况； 7.应用MTT法检测芒果苷的寒热药性：观察各组大鼠含药血清对人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）增殖作用的影响，设3个给药组（芒果苷低剂量组、芒果苷中剂量组、芒果苷高剂量组），一个空白对照组（高糖DMEM完全培养基）每组8个复孔。给药24h后，检测OD值。 结果： 1.大鼠体重的变化：空白组体重增加迅速，苯那普利组增加缓慢且幅度最小； 2.各组大鼠血压的变化：灌胃8周后，与模型组比较，苯那普利组、芒果苷低、中、高剂量组收缩压（SBP）均明显下降，差异有统计学意义（P＜0.01）； 3.流式细胞术检测发现：与模型组比较，苯那普利、芒果苷低、中剂量组外周血CD4+T／CD8+T比值均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.01），芒果苷高剂量组外周血CD4+T／CD8+T比值明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较，苯那普利组、芒果苷中剂量组肾脏的CD4+T／CD8+T比值降低，差异有统计学意义（P＜0.01），芒果苷低、高剂量组和模型组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 4.ELISA检测发现：与模型组比较，苯那普利组、芒果苷低、中剂量组的血清炎症因子IL-6水平明显下调，差异有统计学意义（P＜0.05）；芒果苷高剂量组与模型组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组比较，给药组血清炎症因子IL-10水平均显著上调，差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，芒果苷中剂量组和芒果苷高剂量组的血清炎症因子TNF-α水平明显下调，差异有统计学意义（P＜0.01）；苯那普利组、芒果苷低剂量组与模型组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组比较，给药组肾脏中炎症因子IL-4水平明显下调，差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较，苯那普利组、芒果苷中、高剂量组的肾脏中炎症因子IFN-γ水平明显上调，差异有统计学意义（P＜0.05）；芒果苷低剂量组与模型组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）； 5.对行为学的影响：与给药前比较，苯那普利组、芒果苷低、中、高剂量组给药6周后SHR易激程度趋于稳定； 6.对宏观表征的影响：空白组大鼠出现小便清长、大便质地稀软、喜聚集、易静的症状；模型组大鼠出现易怒易躁、小便深黄、大便干硬的症状；苯那普利组、芒果苷低、中、高剂量组诸症随给药时间，小便渐清、大便渐软； 7.MTT检测发现：芒果苷对HUVEC细胞的生长增殖表现出抑制作用，且在一定范围内，随着浓度增大抑制作用越强。 结论：本实验结果表明高血压发生伴随着炎症反应，促炎因子释放增多，因此，芒果苷抑制T淋巴细胞参与的高血压炎症反应，调控T淋巴细胞亚群比例，减少促炎因子的产生，可以减轻血压升高的症状及靶器官损伤。芒果苷在中药寒热药性里归属于性寒凉的范围。
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