摘要
随着动物胚胎移植技术的不断发展，高质量卵母细胞的需求已成为重要的议题。瘦素是一种主要由脂肪细胞分泌的多功能激素，不仅可以调节机体的新陈代谢，还可以直接作用于促性腺轴和卵巢，参与青春期和生殖发育的调控。 本试验旨在探究瘦素在牛卵母细胞体外成熟中的作用及潜在的影响机制。本研究先通过在牛卵母细胞体外成熟(IVM)培养液中分别添加0、1、10和20ng/mL瘦素来研究卵丘细胞扩展程度，减数分裂进程，细胞分裂情况，得出最佳瘦素浓度，再通过在IVM培养液中添加最佳瘦素浓度来研究瘦素对卵母细胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、线粒体膜电位(MMP)水平及组织蛋白酶B(CB)活性的影响，并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析抗氧化相关基因SOD1、SIRT1、GPX4和凋亡相关基因Survivin、Caspase-3、Bax的表达变化。结果发现，瘦素对卵丘细胞的扩展程度无显著影响（P＞0.05），但10ng/mL瘦素可加快减数分裂进程，与对照组，1ng/mL，20ng/mL瘦素组相比，显著提高了卵母细胞发育至MⅡ的比例(81.67±3.51％vs.64.00±2.01％，67.33±2.51％，67.67±4.04％;P＜0.05)。体外受精后，10ng/mL瘦素处理组到达2细胞即受精卵的比例显著高于对照组，1ng/mL，20ng/mL瘦素组(67.67±2.51％vs.56.00±2.00％，58.67±2.08％，52.00±2.00％;P＜0.05)。10ng/mL瘦素处理的8细胞分裂率显著高于对照组，1ng/mL，20ng/mL瘦素组(44.67±1.52％vs.30.33±2.07％，31.67±2.08％，26.01±1.05％;P＜0.05)，由此得出最佳瘦素浓度为10ng/mL。进一步研究发现，与对照组相比，10ng/mL瘦素组的ROS水平显著降低和GSH水平显著提高(P＜0.05)，并且上调了抗氧化相关基因SOD1、SIRT1、GPX4的表达（P＜0.05）。此外，10ng/mL瘦素还显著提高了MMP的水平(P＜0.05)。同时，经10ng/mL瘦素处理后，CB的活性显著降低(P＜0.05)并伴随着抗凋亡相关基因Survivin表达水平的显著上调和促凋亡相关基因Caspase-3和Bax表达水平的显著下调(P＜0.05)。 综上所述，本研究结果表明在体外成熟的过程中，瘦素的添加(10ng/mL)可以降低氧化应激和细胞凋亡，同时提高MMP来促进卵母细胞的成熟。
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