摘要
背景 绝经后骨质疏松症是雌激素缺乏导致的骨小梁微结构破坏。世界卫生组织(WHO)诊断绝经后妇女骨质疏松症的标准是骨密度(BMD)T值≤-2.5。我们课题组在前期工作中，招募了509名处于绝经过渡期或者绝经后早期的中国南方妇女（41-64岁），采其血清，利用代谢组学技术，发现月桂酸与骨密度呈负相关。 目的 为了验证月桂酸是否与骨密度相关，本课题主要研究以下内容:1、探讨月桂酸对正常小鼠骨组织的影响;2、探讨月桂酸在雌激素缺乏的状态下对去卵巢小鼠骨组织的影响;3、月桂酸对成骨细胞和破骨细胞分化的影响。 材料方法 1、月桂酸对野生型小鼠骨组织的影响 18只C57BL/6雌性小鼠分三组，每组6只，饮用水分别添加浓度为180mg/kg月桂酸（低浓度组）、360mg/kg月桂酸（高浓度组）和Tween80（对照组）。经过8周喂养，取其血清，液质联用仪检测月桂酸浓度，ELISA检测骨钙素(OCN)和Ⅰ型胶原C-末端肽交联(CTX-Ⅰ)。取其股骨固定，microCT检测其骨密度，分析其股骨头松质骨的骨参数。进行碱性磷酸酶(ALP)染色和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测成骨细胞和破骨细胞，对组织切片中的破骨细胞和成骨细胞计数分析。 2、月桂酸对去卵巢小鼠骨质疏松模型的影响 12只C57BL/6雌性小鼠，去卵巢手术后随机分两组，饮用水分别添加浓度为180mg/kg月桂酸（低浓度组）和Tween80（对照组）。经过8周喂养，取其血清，液质联用仪检测月桂酸浓度，ELISA检测OCN和CTX-Ⅰ。取其股骨固定，microCT检测其骨密度，分析其股骨头松质骨的骨参数。进行ALP染色和TRAP染色检测成骨细胞和破骨细胞，对组织切片中的破骨细胞和成骨细胞计数分析。 3、月桂酸对成骨细胞和破骨细胞分化的影响 在含有10％胎牛血清的成骨诱导培养基中，将MC3T3-E1细胞分别用不同浓度的月桂酸（0μM、0.1μM、1μM、10μM、100μM）诱导培养。诱导第14天后行茜素红染色并计数矿化结节。在含有50ng/ml的RANKL的α-MEM培养基中，将RAW264.7细胞分别用不同浓度的月桂酸（0μM、0.1μM、1μM、10μM、100μM）诱导培养。在第3天和第5天分别提取细胞全蛋白，用Westernblot检测破骨细胞分化特异蛋白活化T细胞核因子c1(NFATc1)的表达量。在第7天，进行TRAP染色，对TRAP阳性多核细胞计数分析。 4、统计学处理 使用SPSS14.0软件对数据进行统计学分析，测得的结果以均值±标准差表示，用ANOVA进行各组间的方差分析和差异显著性检验，以P＜0.05为显著性差异，以P＜0.01为非常显著性差异。 结果 1、在野生型小鼠中，与对照组相比，实验组（低浓度组和高浓度组）的股骨干骺端骨小梁的ALP阳性细胞计数和TRAP阳性多核细胞计数显著增多，OCN呈下降趋势，CTX-Ⅰ呈上升趋势，骨体积分数(BV/TV(％))、骨小梁数量(Tb.N)和骨小梁厚度(Tb.Th)均呈下降趋势，但骨小梁间隔(Tb.Sp)呈上升趋势。 2、在去卵巢小鼠中，与对照组相比，低浓度组的股骨干骺端骨小梁的ALP阳性细胞计数显著增多，OCN和CTX-Ⅰ都呈下降趋势，BV/TV(％)、Tb.N、Tb.Th均呈下降趋势，但Tb.Sp呈上升趋势。 3、月桂酸浓度为1μmol/L时，诱导成的成骨细胞数目最多。月桂酸浓度为10μmol/L时，诱导成的破骨细胞数目最多。 结论 1、月桂酸可能通过促进成骨细胞和破骨细胞分化，影响正常小鼠的骨小梁的重建，可能参与了骨质疏松症的发生发展。 2、月桂酸可能通过促进成骨细胞和破骨细胞分化，影响骨质疏松模型小鼠的骨小梁的重建，可能参与了骨质疏松症的发生发展。 3、1μM浓度月桂酸主要促进成骨细胞生长，10μM浓度月桂酸主要促进破骨细胞生长。
NETL