摘要
结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率都处于上升趋势。BRAF基因的突变在结直肠癌的发生和发展中起到重要作用。BRAFV600E突变基因的判断对结直肠癌预后及指导结直肠癌治疗具有重要意义。目前常用的检测BRAFV600E突变基因的方法有免疫组化和基因测序等方法，但都具有一定的局限性。为此，我们尝试探索找寻一种新的、快速的辅助临床病理诊断的检测结直肠癌中BRAFV600E突变基因的方法。 近红外光（nearinfrared,NIR）是介于可见光和中红外光之间的电磁波，美国材料检测协会将近红外光谱区定义为波长780-2526nm的光谱区（波数约为1200-4000cm-1）。利用近红外漫反射光谱高特异性快速识别的特性，扫描结直肠癌组织常规石蜡切片，应用化学计量学技术对所测光谱进行处理分析，建立结直肠癌组织BRAFV600E突变基因判别模型，与目前常用的免疫组化检测BRAFV600E突变基因方法比较，初步探寻一种新的快速识别结直肠癌组织BRAFV600E突变基因的方法。 方法 1、选择经二代测序确定BRAF基因突变状态的58例结直肠癌组织标本，其中８例为突变型，50例为野生型。 2、选取其中12例结直肠癌组织石蜡包埋切片（6例BRAF野生型，6例BRAF突变型），用基于积分球的近红外光谱漫反射记录信号，采用判别分析法(discriminantanalysis,DA)构建识别BRAFV600E突变基因模型。 3、选取经二代测序明确BRAF基因突变状态的4例结直肠癌组织石蜡包埋切片（2例野生型，2例突变型），验证BRAFV600E突变基因近红外光谱判别分析（DA）模型。 4、扫描42例结直肠癌组织石蜡包埋切片，采用建立的BRAFV600E突变基因近红外光谱DA模型，预测BRAFV600E突变基因。 5、用免疫组化法检测上述42例结直肠癌组织标本BRAFV600E突变基因蛋白表达，并与近红外光谱方法预测BRAFV600E突变基因结果及二代测序结果比较。 结果 采用12例（6例野生型和6例突变型）结直肠癌组织石蜡包埋切片建模，校正集正判率为100%。采用4例（2例野生型和2例突变型）结直肠癌组织石蜡包埋切片，验证BRAFV600E突变基因近红外光谱DA模型判断BRAFV600E突变基因，其结果与二代测序结果一致。表明BRAFV600E突变基因近红外光谱DA模型建立。利用该近红外光谱DA模型预测经二代测序明确BRAF基因突变状态的42例结直肠癌组织石蜡包埋切片，检测到７例阳性（＋），35例阴性（－），预测集正判率为83.3%。 免疫组化检测BRAFV600E突变基因蛋白在结直肠癌组织中的表达，结果表明，BRAFV600E突变基因蛋白表达着色部位主要位于肿瘤细胞胞质，13例弱阳性（＋），１例中阳性（＋＋），28例阴性（－），与经二代测序检测结果比较，正判率为66.7%。 通过近红外光谱预测的42例BRAF野生型结直肠癌组织中，近红外光谱识别到其中7例为BRAF突变型，同时采用免疫组化BRAFV600E（VE1）抗体检测到14例为BRAF突变型，检测结果与二代测序结果比较，近红外光谱的正判率（35/42,83.3%），免疫组化(28／42,66.7%)，两者之间正判率比较P值gt;0.05，无统计学差异。 结论 本研究建立了BRAFV600E突变基因近红外光谱DA模型，并利用该模型对组织标本BRAFV600E突变基因进行预测，预测结果与二代测序检测结果一致性较高，与免疫组化无明显差异。但本实验样本量较小，可变因素较多，是一种方法论的初步探讨，近红外光谱技术识别BRAFV600E突变基因能否作为一种新的检测方法应用于临床，还需要进一步扩大样本量深入研究。
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