摘要
贵州安关杂交牛（红安×关杂交牛），是贵州省为了对地方黄牛品种关岭牛进行品种改良，通过红安×关杂交体系（红安格斯♂×关岭牛♀）对关岭牛进行品种杂交得到的杂交品种。WFIKKN2基因（WAP,Follistatin/kazal,Immunoglobulin,KunitzandNetrindomaincontaining-2），又被称为生长分化因子相关血清蛋白1（Growthanddifferentiationfactorassociatedserumprotein-1，Gasp1），是动物个体内一种对肌肉生长抑制素具有调控作用的多域蛋白。肌肉抑制素MSTN基因（Myostatin，MSTN），又称为生长分化因子8（Growthdifferentiationfactor8，GDF8），是动物体内对肌肉生长发育起着广泛的调控负作用的生长因子。WFIKKN2基因可以与MSTN基因前肽蛋白结合，调控MSTN基因的活性。两种基因在贵州红安×关杂交牛群体中研究甚少。本试验以贵州红安×关杂交牛为研究对象，对通过对不同月龄关岭牛与红安×关杂交牛生长性能测定比较，探究其杂交改良优势。同时利用分子手段对贵州红安×关杂交牛WFIKKN2和MSTN基因编码区序列进行克隆，并进行生物信息学分析。将生长性能测定数据与WFIKKN2、MSTN基因基因型进行相关分析，以期发现筛选到具有研究价值的功能SNPs位点。此外，采用实时荧光定量PCR的手段对WFIKKN2和MSTN两个基因在成年贵州红安×关杂交牛心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、小肠、脂肪、腰大肌、背最长肌、肩峰及后腿肌等组织中mRNA水平上的表达规律进行探究，以期得到WFIKKN2和MSTN两个基因在贵州红安×关杂交牛组织内的表达规律。试验的主要研究结果如下： （1）分别对6、12、18、24月龄阶段的关岭牛和贵州红安×关杂交牛各60头进行生长性能测定，对10头关岭牛和10头贵州红安×关杂交牛进行屠宰测定，结果发现贵州红安×关杂交牛群体各阶段生长性能和屠宰性能均优于关岭牛，杂交改良优势明显。 （2）本试验成功克隆得到贵州贵州红安×关杂交牛WFIKKN2、MSTN基因的CDS区全序列，WFIKKN2基因CDS区长度为1725，编码574个氨基酸，MSTN基因CDS区全长1128bp，编码375个氨基酸。发现WFIKKN2基因SNPs位点4个，分别是第一外显子c.28G＞T，第二外显子c.956A＞G，c.962A＞C，c.1140T＞C，均造成mRNA二级结构发生改变。其中c.956A＞G，c.1140T＞C为同义突变，c.28G＞T，c.962A＞C为错义突变，造成编码氨基酸序列发生甘氨酸（Gly）＞色氨酸（Trp），亮氨酸（Leu）＞苯丙氨酸（Phe）的改变，导致编码蛋白二、三级结构的改变，略微提高亲水性，增加稳定性。MSTN基因CDS区长度1128bp，编码375个氨基酸，发现SNPs位点2个，c.1077A＞C、c.1083C＞T均位于第三外显子，为同义突变，c.1077A＞C位点提高了最小自由能。 （3）本试验通过对109头贵州红安×关杂交牛WFIKKN2、MSTN基因SNPs位点进行分型测定及遗传参数分析，结合体尺数据进行关联性分析，结果发现发现不同基因型个体生长性能存在差异，其中c.28G＞T位点基因型与体重和胸宽差异性显著，c.962A＞C位点基因型与体重、胸宽、管围和肩部围指标差异性显著，c.1140T＞C位点基因型与臀长和管围差异性显著，c.1077A＞C位点多态性在体重、管围、肩部围上差异显著，c.1083C＞T位点在管围指标中存在显著差异。 （4）本试验通过对成年贵州红安×关杂交牛WFIKKN2、MSTN基因在心、肝、脾、肺、肾、小肠、脂肪、背最长肌、腰大肌、后腿肌和肩峰等部位的组织表达分析发现，WFIKKN2和MSTN基因在肌肉当中相对表达量显著高于内脏器官，两个基因的组织表达趋势相似。
NETL