摘要
溃疡性结肠炎(Ulcerativecolitis，UC)是一种主要发生于结肠黏膜及黏膜下层的慢性非特异性肠道疾病，属于炎症性肠病（Inflammatoryboweldiseases，IBD）范畴。肝胆疾病是溃疡性结肠炎相对常见的肠外表现。目前用于治疗溃疡性结肠炎的药物可能会导致肝功能受损，因此，寻找治疗溃疡性结肠炎肝损伤的药物以用于溃疡性结肠炎的辅助治疗具有重要的意义。牡荆苷是从山楂叶中提取的一种天然黄酮碳苷类化合物，研究表明牡荆苷具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒、保肝护肝等生物活性。本项目探讨了牡荆苷是否能通过对炎症起到抑制作用，从而达到治疗溃疡性结肠炎肝损伤的目的。 目的: 体内实验研究牡荆苷对葡聚糖硫酸钠(Dextransulfatesodium，DSS)诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠肝损伤的保护作用，体外实验进一步探索牡荆苷抗炎的细胞和分子作用机制。 方法: 1.体内实验:将48只雄性BALB/c小鼠随机分为4组:对照组、DSS模型组、牡荆苷低剂量(40mg/kg)给药组及牡荆苷高剂量(80mg/kg)给药组，n=12。对照组小鼠自由饮用蒸馏水，其余各组小鼠连续7天自由饮用4％DSS溶液以建立小鼠UC模型。在造模的同时，牡荆苷低、高剂量(40、80mg/kg)组小鼠分别进行灌胃给药，连续给药7天，对照组与DSS模型组小鼠灌予同体积的蒸馏水。记录实验期间各组小鼠每天的体重变化以及便血情况。实验结束后评估小鼠结肠炎严重程度和肝脏损伤程度，记录结肠长度，计算肝脏系数，通过生化试剂盒测定肝脏组织肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及抗氧化酶指标过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性，终点显色法检测肝组织内毒素(LPS)含量。ELISA法检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和IL-1β等炎症因子的水平，免疫荧光法检测组织中巨噬细胞表面标记物F4/80的表达及分布，并用westernblot技术分析检测toll样受体4(TLR4)/核转录因子NF-κBp65信号通路相关蛋白(TLR4、p65、p-p65、IκBα、p-IκBα)的表达。 2.体外实验:采用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测牡荆苷对HepG2细胞活力的影响。用LPS诱导HepG2细胞得到肝损伤模型，用Real-timePCR技术检测细胞的炎症因子（TNF-α、IL-6和IL-1β）的含量变化。通过westernblot检测细胞TLR4、p65、p-p65和p-IκBα等蛋白的表达。 结果: 1.动物实验表明，与对照组相比，模型组小鼠出现DAI评分升高和结肠缩短等溃疡性结肠炎的特征现象，肝脏系数明显升高。且DSS可引起肝脏ALT、AST活性增加及CAT、GSH-PX活性下降。经过牡荆苷治疗后小鼠结肠炎症状得到缓解，肝脏系数明显降低，肝脏ALT、AST和CAT、GSH-PX水平均有所改善。此外，与对照组相比，小鼠在给以DSS后肝组织LPS水平和TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子的含量均有不同程度的升高，免疫荧光结果显示模型组小鼠巨噬细胞活化明显，westernblot结果表明模型组小鼠肝脏TLR4、p-p65和p-IκBα的表达出现了不同程度的增加。经过牡荆苷治疗后，小鼠肝组织内LPS水平和TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子的含量均有不同程度的降低，给药组小鼠肝脏TLR4、p-p65和p-IκBα等蛋白的表达更接近对照组。 2.MTT结果显示牡荆苷的浓度在5-640μM时，HepG2细胞存活率与对照组相比无明显下降，确定选取10、20、40和80μM这四个药物浓度进行后续实验。与模型组相比，牡荆苷干预24h后，细胞内TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子的mRNA表达及TLR4、p-p65、p-IκBα的蛋白表达水平均有所下调。 结论: 本研究初步证实了牡荆苷能有效减轻DSS致急性溃疡性结肠炎小鼠的肝脏损伤，抑制炎症反应，其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB信号通路有关，提示牡荆苷可作为治疗结肠炎肝损伤的一种有前景的辅助治疗策略。
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