摘要
目的: 探讨甲酰肽受体2（Formylpeptidereceptor2，FPR2）调控小胶质细胞M1/M2表型极化过程;补阳还五汤是否通过FPR2调控小胶质细胞M1/M2表型极化，减轻脑缺血再灌注后的炎症损伤。 方法: 选取SPF级SD雄性大鼠(250-300g)，运用线栓法建立大脑中动脉栓塞(Middlecerebralarteryocclusion，MCAO)模型，造模成功后，根据神经功能评分在1～3分为合格，选取合格的大鼠进行实验。 1、FPR2对脑缺血再灌注后小胶质细胞极化的影响 (1)随机将大鼠分为Sham组和MCAO组，每组6只。分别在再灌注后6h、24h、2d、3d、7d取大鼠缺血侧脑组织，蛋白免疫印迹(WesternBlot，WB)检测不同时间点内源性FPR2表达和酶联免疫吸附法(Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)检测FPR2内源性配体消退素D1(ResolvinD1，RvD1)的表达情况。 (2)随机将大鼠分为Sham组、MCAO组、RvD1组、RvDI联合FPR2抑制剂Boc-2(RvD1+Boc-2)组，线栓阻塞大鼠大脑中动脉后立即腹腔注射RvD1(0.4μg/kg)，另外在造模前30min通过腹腔注射Boc-2(0.4mg/kg)。再灌注后24h取大鼠缺血侧脑组织，TTC染色检测脑梗死体积，免疫荧光（Immunofluorescence，IF）检测FPR2/Iba-1、MPO、CD16/Iba-1、CD206/Iba-1的表达。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测M1型炎症因子TNF-α、iNOS、IL-1β和M2型抗炎因子Arg-1、TGF-β1、IL-10mRNA的表达。 2、补阳还五汤通过FPR2调节小胶质细胞极化减轻脑缺血再灌注后炎症损伤 (1)随机将大鼠分为Sham组，MCAO组、补阳还五汤(BYHWD)组，每组6只。术后待大鼠清醒后给予补阳还五汤灌胃2次/d（16g/kg）;分别在再灌注后6h、24h、2d、3d、7d取大鼠缺血侧脑组织，采用WB检测内源性FPR2表达和ELISA检测不同时间点RvD1的表达情况。 (2)随机将大鼠分为Sham组、MCAO组、BYHWD组、BYHWD+Boc-2组。再灌注后24h，采用平衡木行走测试检测大鼠协调能力、抓力实验检测大鼠抓握能力以及TTC染色检测脑梗死体积。运用免疫荧光检测MPO、FPR2/Iba-1、CD16/Iba-1、CD206/Iba-1的表达。RT-qPCR检测M1型炎症因子TNF-α、iNOS、IL-1β和M2型抗炎因子Arg-1、TGF-β1、IL-10mRNA的表达。 结果: 1、通过第一章实验研究发现: (1)WB结果显示:脑缺血再灌注后内源性FPR2表达增加，24h增加更为显著(P＜0.05)，ELISA结果显示:与Sham组比，不同时间点内源性RvD1表达都降低（P＜0.05）。 (2)给予RvD1后脑梗死体积和MPO表达减少(P＜0.05)，而RvD1+Boc-2组脑梗死体积和MPO表达增加。免疫荧光双染显示:FPR2与Iba-1共定位表达，观察到外源性RvD1进一步增加FPR2的表达(P＜0.05)。同时发现外源性RvD1治疗后CD16+/Iba-1+细胞数的表达减少(P＜0.05)，CD206+/Iba-1+细胞数的增加(P＜0.05)。RT-qPCR显示:RvD1干预后抑制M1型小胶质细胞的炎症介质TNF-α、iNOS、IL-1βmRNA的表达(P＜0.05)，促进M2型小胶质细胞的抗炎介质Arg-1、IL-10、TGF-β1mRNA的表达(P＜0.05)。而RvD1+Boc-2组增加M1型小胶质细胞的炎症介质表达，抑制M2型小胶质细胞的抗炎介质表达。 2、通过第二章实验研究发现; (1)WB和ELISA结果显示:给予BYHWD后内源性FPR2和RvD1表达增加，且在24h增加更为显著(P＜0.05)。 (2)与MCAO组比，补阳还五汤能改善大鼠平衡功能和抓力大小（P＜0.05）;但联合使用Boc-2后，大鼠平衡功能下降和抓力大小降低(P＜0.05)。给予BYHWD后脑梗死体积减少和MPO表达减少(P＜0.05)，而BYHWD+Boc-2组脑梗死体积和MPO表达增加。免疫荧光双染显示:FPR2与Iba-1共定位表达，观察到BYHWD进一步增加FPR2的表达(P＜0.05)。同时发现BYHWD治疗后CD16+/Iba-1+细胞数的表达减少(P＜0.05)，CD206+/Iba-1+细胞数的增加(P＜0.05)。RT-qPCR显示:BYHWD干预后抑制M1型小胶质细胞的炎症介质TNF-α、iNOS、IL-1βmRNA的表达(P＜0.05)，则促进M2型小胶质细胞的抗炎介质Arg-1、IL-10、TGF-β1mRNA的表达(P＜0.05)。而BYHWD+Boc-2组增加M1型小胶质细胞的炎症介质表达，抑制M2型小胶质细胞的抗炎介质表达。 结论: 1、FPR2与RvD1相结合促进小胶质细胞从M1型向M2型转化，减轻大鼠脑缺血再灌注后的炎症损伤; 2、补阳还五汤调控小胶质细胞从M1型向M2型极化，减轻炎症损伤，其机制可能与增加FPR2作用有关。
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