摘要
目的:筛选瓜蒌薤白半夏汤(GXBD)对缺血缺氧损伤的内皮祖细胞的保护作用的有效部位及最佳浓度，并探寻有效部位的作用靶点;初步明确该经典方剂干预“胸痹、心痛”的物质基础及作用机制。 方法:(1)药物制备:将该方中药干燥，打粉过筛，用50％乙醇回流提取3次，合并提取液，减压回收溶剂，真空冷冻干燥，得到乙醇提取物干膏。将干膏溶解于去离子水，使浓度约为1.5g生药/ml。分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水依次萃取。药渣再煮，得药渣水煎液。分别依次标记为SM1-SM6。 (2)细胞处理:采取差速贴壁法提取大鼠骨髓源内皮祖细胞，以无血清M199培养液，置于缺氧培养箱培养12h，建立缺血缺氧损伤细胞模型。 (3)有效部位及最佳浓度筛选:培养液添加系列浓度的SM1-SM6组分，用倒置相差荧光显微镜观察细胞形态，并MTT法检测各组细胞存活率，筛选出保护缺血缺氧损伤内皮祖细胞的有效部位及其最佳浓度。 (4)信号通路研究:采用表达谱基因芯片初步筛选细胞内差异表达的基因，初步筛选发挥作用的信号通路。 (5)作用机制研究:采用总抗氧化能力和总自由基检测试剂盒分别检测各组细胞中总抗氧化能力和总自由基，初步确定作用机制。 结果:(1)各组细胞存活率:认为设定对照组细胞存活率为100％，模型组细胞存活率仅为50％左右，有显著性差异（p＜0.05）。与模型组细胞相比，SM1、SM2、SM3组细胞存活率无显著性升高(p＞0.05);SM4、SM5、SM6组细胞存活率显著升高，有显著性差异（p＜0.05），对缺血缺氧损伤内皮祖细胞均能起到保护的作用，且最佳浓度均为100μg/ml。 (2)与模型组相比，SM4、SM5、SM6均能提高细胞的总抗氧化能力，降低细胞内总自由基含量，有显著性差异（p＜0.05）。 结论:瓜蒌薤白半夏汤能够保护缺血缺氧损伤的内皮祖细胞，其作用机制可能是提高总抗氧化能力，降低总自由基含量，从而到达保护细胞缺血缺氧损伤的作用。
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