摘要
目的:研究远志炮制前后质变与量变特征成分的实质、变化规律与转化机制，探讨远志炮制减毒机理。 方法与结果: (1)远志中寡糖酯类成分的分离与鉴定。采用70％乙醇提取、正丁醇萃取和D101大孔树脂、硅胶柱、凝胶柱、中低压柱层析、半制备液相色谱，结合HPLC指纹图谱追踪，对远志中寡糖酯类成分进行定向分离。结果分离得到11个化合物，通过薄层鉴别，NMR、MS等波谱分析和参考文献，确定它们的结构，分别为西伯利亚远志糖A5(sibiricoseA5)、西伯利亚远志糖A6(sibiricoseA6)、球腺糖A(glomeratoseA)、远志蔗糖酯B(tenuifolisideB)、3，6''-二芥子酰基蔗糖(3，6''-disinapoylsucrose)、黄花远志素A(arillaninA)、远志蔗糖酯A(tenuifolisideA)、远志蔗糖酯C(tenuifolisideC)、远志寡精J(tenuifolioseJ)、远志寡精H(tenuifolioseH)、远志寡精A(tenuifolioseA)。 (2)远志中4种成分含量比较。建立远志不同炮制饮片中质变与量变的4种特征成分（黄花远志素A、远志寡精J、远志寡精H、远志寡精A）的HPLC定量方法，比较这些特征成分在远志不同炮制饮片中的含量动态变化规律。结果远志经甘草汁和清水煮制的20h内，4种寡糖酯含量均随着炮制程度的加深呈现出降低的趋势。远志经甘草汁和清水煮至20h时，远志寡精J已检测不出。清水煮远志和甘草汁煮远志相比，4种寡糖酯含量均无明显差异。蜜远志与生远志相比，黄花远志素A含量减少较多，其余成分含量变化不大。远志木心中4种寡糖酯均能检测到，但是与生品相比，含量显著偏低。 (3)远志炮制前后质变与量变化合物转化机制研究。参照甘草汁煮远志条件，制备远志炮制前后质变的12种化合物模拟甘草汁品，采用HPLC和HPLC-TOF/MS方法，通过已知对照品图谱流出时间定位、紫外光谱比对、质谱数据和数据库匹配，分析各化合物模拟炮制品的化学成分，探讨远志甘草汁煮制前后质变化合物的转化机制。结果11种寡糖酯化合物模拟炮制品中均检测到了其分子式中酯键断裂后对应产生的小分子有机酸，3，6''-二芥子酰基蔗糖、黄花远志素A、远志蔗糖酯A和远志蔗糖酯C四者的模拟炮制品中还检测到了其对应的次级苷，远志皂苷B模拟炮制品中检测到了其异构体。 (4)远志水蒸汽蒸馏液GC-MS分析与鉴定。按照药典中挥发油提取方法对远志进行提取，收集水蒸汽蒸馏液进GC-MS仪检测。结果通过NIST05a.L数据库检索、匹配，共检出28种化学成分，包括二叔丁基对甲酚、O-丁基，O-1，2,2-三甲基丙基甲基膦酸酯、辛醛、环辛烷、环戊烯基三甲基硅烷、辛基苯酚等对呼吸道、皮肤和眼睛有刺激性作用的化合物。 (5)远志不同化学部位模拟炮制前后指纹图谱比较。称取远志药材，经70％乙醇提取，正丁醇萃取和大孔树脂不同浓度乙醇洗脱，回收溶剂、干燥，得远志25％、40％和70％乙醇洗脱部位粉末。对以上部位模拟炮制前后指纹图谱进行HPLC测定并参照对照品对化合物进行归属。结果远志25％和40％乙醇部位主要为寡糖酯和（圸）酮类成分，70％乙醇部位主要为皂苷类成分。远志各化学部位生品与其炮制品图谱峰数量和峰面积具有显著差异。经炮制后，大部分寡糖酯和皂苷类成分峰面积显著降低，并产生对香豆酸、苯甲酸等有机酸。以上显示远志经炮制后一些皂苷和糖酯苷类有质和量的变化。 (6)远志不同化学部位模拟炮制前后及苯甲酸对豚鼠咽喉和胃肠毒性的研究比较。选取豚鼠为实验动物，采用主观打分和客观统计方法，研究远志不同化学部位生、制品和苯甲酸对豚鼠咽喉刺激性作用，同时对豚鼠进行解剖，考察对其胃肠毒性作用。结果显示远志及苯甲酸对豚鼠有一定毒性作用，具体表现为声音嘶哑甚至失音，胃液分泌量减少，胃液的pH值减小，蛋白酶活性减小，同时伴随肠壁变薄、胀气、结节坏死和胃壁皱缩、出血现象。远志药品粉末的以上毒性作用经模拟炮制后均有减弱趋势。 结论:远志制炮制后，糖酯类、皂苷类和有机酸类物质有显著的量变、质变。远志中多数寡糖酯和皂苷类成分，经甘草汁煮或水煮后可水解生成其次级苷或苷元。其中，tenuifolioseA、H、J可水解生成毒性、刺激性成分苯甲酸。TenuifolisideA、B可水解生成毒性成分对羟基苯甲酸;但苯甲酸在煮制过程中升华，导致毒性降低。本研究创新性地从中药炮制前后成分转化方面来探讨远志的炮制减毒原理，为远志未来的开发和利用提供了科学依据。
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