摘要
目的：研究洗心汤重要单体组分配伍对AD模型大鼠学习记忆能力的影响，以及对AD细胞模型神经元损伤的保护作用，初步探讨此类方药防治AD的作用机制，以期为防治AD提供相关实验依据。 方法：⑴体内实验：以D-半乳糖腹腔注射和Aβ25-35双侧脑室注射建立复合型AD模型，采用Morris水迷宫、HE染色、免疫组化、蛋白印迹等方法检测人参皂苷Rg1和β-细辛醚配伍对AD模型大鼠的空间学习记忆能力、胆碱能神经元ACH、AChE、ChAT含量与活性表达，以及Aβ1-42含量的影响，初步探索其在防治AD过程中发挥的作用与相关机制。⑵体外实验：以Aβ25-35诱导PC12细胞建立AD细胞模型，采用形态学检测、MTT、ELISA等方法，探讨人参皂苷Rg1和β-细辛醚配伍抗Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用，观察胆碱能神经元ACH、AChE、ChAT含量及活性表达，Aβ1-42含量变化，初步探讨其抗神经细胞损伤的作用机理。 结果：⑴体内实验：①D-半乳糖和Aβ25-35联合用药可导致大鼠的学习记忆能力减退（P＜0.01），安理申、洗心汤及人参皂苷Rg1和β-细辛醚配伍均可明显改善大鼠的学习记忆障碍（P＜0.05，P＜0.01），配伍组相比洗心汤组无显著性差异。②D-半乳糖和Aβ25-35联合用药可导致大鼠海马CA1区神经元出现明显损伤，神经元层次不清晰，排列疏松，部分呈节段性丢失，形态不规则，树突轴突消失，神经元崩解，可见大量胶质细胞增生。安理申、洗心汤、组分配伍可改善D-半乳糖联合Aβ25-35诱导的AD大鼠海马区细胞损伤，维持神经元数目及结构整齐，从而对D-半乳糖联合Aβ25-35引起的海马神经元损伤起到保护作用。③与模型组比较，各给药组大鼠海马区AChE蛋白表达均明显降低，ChAT蛋白表达均明显升高（P＜0.05，P＜0.01），ChAT活性增强（P＜0.01），AChE活性降低（P＜0.05，P＜0.01）。各治疗组大鼠海马区ACH的水平显著增加（P＜0.01）。与洗心汤组比较，组分配伍中高剂量组AChE的活力相对降低，具有显著性差异（P＜0.01），免疫组化结果显示组分配伍低高剂量组AChE蛋白表达相对减少，具有显著性差异，但在WB实验中各治疗组AChE蛋白表达水平均无显著性差异；组分配伍中剂量组ChAT的活力相对洗心汤组增强，蛋白表达增多，具有显著性差异（P＜0.01），同时在WB实验中，组分配伍中高剂量组ChAT蛋白表达水平相对洗心汤组升高（P＜0.05，P＜0.01）；生化法检测发现，与洗心汤组比较，安理申组、组分配伍低剂量组ACH的水平相对增加，具有显著性差异（P＜0.01）。④免疫组化结果发现，与模型组比较，各给药组大鼠海马内Aβ1-42表达显著减少（P＜0.01），其中组分配伍中剂量降低趋势最明显，ELISA法实验进一步检测发现，各治疗组大鼠海马区Aβ1-42的水平亦显著降低（P＜0.05，P＜0.01）。与洗心汤组比较，组分配伍低中高剂量组Aβ1-42蛋白表达相对降低，具有显著性差异（P＜0.01）。而ELISA结果表明组分配伍低中高剂量组Aβ1-42水平均无明显降低。⑵体外实验:①Aβ25-35可剂量依赖性地降低PC12细胞活性（P＜0.01），人参皂苷Rg1、β-细辛醚及其配伍可减弱Aβ25-35的毒性作用（P＜0.01，P＜0.05）。②人参皂苷Rg1、β-细辛醚及其配伍可提高Aβ25-35损伤细胞存活率，且配伍组优于单体用药组（P＜0.01）。同时人参皂苷Rg1、β-细辛醚及其配伍可明显提升ACH、ChAT含量，减少AChE、Aβ1-42生成（P＜0.01），且配伍组作用优于单体用药组（P＜0.01）。 结论：1.安理申、洗心汤、洗心汤组分配伍能够在一定程度上改善D-半乳糖联合Aβ25-35诱导的AD复合模型大鼠空间学习记忆能力，保护大鼠海马区神经元形态结构，其机制可能与调节大鼠海马内胆碱能神经递质及相关酶的活性表达，抑制Aβ沉积有关。其中，组分配伍低剂量组可明显升高大鼠海马ACH含量，组分配伍中剂量组可增加ACH合成酶ChAT的表达量。2.人参皂苷Rg1和β-细辛醚配伍抗Aβ25-35导致的PC12细胞损伤具有明显协同作用，其机制可能与改善胆碱能损伤，抑制Aβ沉积有关。
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