摘要
目的 采用网络药理学方法，构建“中药-有效成分-靶点-通路”网络，探讨双石通淋胶囊可能的作用机制；建立慢性前列腺炎大鼠模型，研究双石通淋胶囊对慢性前列腺炎的主要药效作用及其作用机制。 方法 1．以双石通淋胶囊为研究对象，采用网络药理学方法，通过TCMSP数据库、BATMAN-TCM数据库、Genecards数据库、Drugbank数据库进行双石通淋胶囊抗慢性前列腺炎的靶点预测，将得到的靶点信息导入STRING数据库，进行GO和KEGG分析，用Cytoscape软件构建“中药-有效化合物-靶点”网络，将排名靠前的化合物和治疗靶点进行分子对接验证。 2．取72只SD雄性大鼠，体重在250g左右，正常喂养1周后随机分成6组：假手术组，模型组，阳性对照组，双石通淋胶囊低、中、高剂量组，每组12只。各组大鼠经腹腔注射麻醉，无菌条件下通过给前列腺内注射0.1ml完全弗氏佐剂，建立SD大鼠慢性前列腺炎模型，假手术组注射等量的生理盐水，造模7d后开始给药。治疗组给予双石通淋胶囊混悬液灌胃：低剂量组(1.25g/kg/d)、中剂量组(2.5g/kg/d)、高剂量组(5.0g/kg/d)，阳性对照组给予盐酸坦索罗辛缓释胶囊0.0208mg/kg/d，假手术组和模型组给予等剂量CMC-Na灌胃，连续灌胃28d，灌胃期间检测大鼠前列腺机械痛的变化，28d后收集各组前列腺组织和血液标本进行测定。检测各组大鼠前列腺指数，HE染色观察前列腺组织的病理变化，免疫组化染色评估前列腺组织中COX-2、IL-1β和TNF-α的变化，ELISA法检测大鼠血清和组织中IL-1β和TNF-α的含量，用试剂盒检测前列腺组织和血清中T-SOD、CAT、MDA、GSH-PX的含量以及Westernblot方法检测大鼠前列腺组织中MAPKs信号通路和IKKβ蛋白、AMPK信号通路和SIRT1蛋白的表达。 结果 1.网络药理学和分子对接研究结果表明，双石通淋胶囊中的槲皮素、木犀草素、山奈酚、汉黄芩素、异牡荆黄素、β-谷甾醇、薯蓣皂素和黄芩素等有效化合物可能通过破骨细胞分化、FoxO信号通路、HIF-1信号通路、TNF信号通路、鞘脂类信号通路、MAPK信号通路等发挥抗炎、抗氧化、免疫调节、抗感染和控制内分泌失调等作用。 2.动物实验研究表明，给大鼠前列腺注射CFA建立慢性前列腺炎模型成功。与模型组比较，给予双石通淋胶囊灌胃治疗后，治疗组大鼠机械痛阈值升高，各组大鼠的前列腺组织炎症有不同程度的改善。免疫组化结果显示双石通淋胶囊可以使前列腺组织内细胞因子COX-2和促炎症因子TNF-α的表达水平降低。组织和血清中T-SOD、CAT、GSH-PX活性较模型组升高，MDA活性降低。ELISA结果显示给药组组织中TNF-α的含量较模型组降低。Westernblot结果显示双石通淋胶囊可以使P38、ERK1/2和JNK的磷酸化表达降低，AMPK的磷酸化表达升高，IKKβ蛋白表达降低，SIRT1蛋白表达升高。其机制为激活了SIRT1/AMPK通路，抑制MAPKs信号通路和NF-κB信号通路的激活。 结论 双石通淋胶囊可通过镇痛、抗炎和抗氧化作用对慢性前列腺炎起到显著的治疗效果，且可能是通过激活SIRT1/AMPK通路，抑制MAPKs信号通路和NF-κB信号通路的激活产生抗炎作用。本研究为双石通淋胶囊临床治疗慢性前列腺炎提供了理论依据和实验基础。
NETL