摘要
目的：制备氯胺酮致发育期神经毒性模型小鼠，研究丁苯酞对神经毒性小鼠的影响及作用机制 方法：出生7日龄的健康C57/BL6小鼠44只，按照随机数字量表法分为四组：对照组（C组）、氯胺酮组（K组）、丁苯酞低剂量组（L组）、丁苯酞高剂量组（H组）。K组小鼠给予腹腔注射氯胺酮75mg/kg，L组小鼠给予腹腔注射氯胺酮75mg/kg+丁苯酞80mg/kg,H组小鼠给予腹腔注射氯胺酮75mg/kg+丁苯酞160mg/kg，C组腹腔注射5μl生理盐水。每日一次，连续腹腔注射三天。在麻醉过程中，将小鼠放在保温箱中维持温度在26-28℃，并维持2L/min低流量供氧。麻醉期间密切关注小鼠呼吸及皮肤黏膜变化。全麻结束后，各组小鼠放回笼中继续饲养。在末次给药处理后24小时后，每组取6只小鼠断头取海马组织,采用westernblot方法检测PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT及自噬相关指标LC3和becline-1的表达情况。其余小鼠在30日龄时进行水迷宫测试，检测各组小鼠学习记忆能力。水迷宫测试结束后，采用HE染色的方法观察各组小鼠海马细胞形态。 结果：1.水迷宫结果显示：定位航行实验中，各组小鼠第1-5天逃避潜伏期比较，差异有统计学意义（Plt;0.05），随着训练天数的增加，各组小鼠逃避潜伏期均呈下降趋势，与C组相比，K组小鼠在第2-5天，逃避潜伏期显著延长，差异具有统计学意义（Plt;0.01），与K组相比，L组和H组在第4-5天，逃避潜伏期缩短，差异具有统计学意义（Plt;0.05），L组与H组相比，逃避潜伏期无统计学差异（Pgt;0.05)。空间探索试验中，与C组相比，K组小鼠目标象限停留时间百分比和平台穿越次数均显著减少（Plt;0.01），L组小鼠目标象限停留时间百分比和平台穿越次数均显著减少（Plt;0.01），H组小鼠目标象限停留时间百分比和平台穿越次数无显著差异（Pgt;0.05）,与K组相比，L组小鼠目标象限停留时间百分比和平台穿越次数均增加（Plt;0.05），H组小鼠目标象限停留时间百分比和平台穿越次数均显著增加（Plt;0.01）。与L组相比，H组小鼠目标象限停留时间百分比和平台穿越次数均增加（Plt;0.05）。 2.HE结果显示： 对照组小鼠海马神经元形态完整，排列紧密；氯胺酮组小鼠海马神经元细胞排列散乱，部分神经元缺失；低剂量丁苯酞组和高剂量丁苯酞组小鼠海马神经元与氯胺酮组相比细胞完整性，排列散乱，神经元缺失等问题都得到改善。 3.Westernblot结果显示： 各组中PI3K、AKT蛋白无统计学差异（Pgt;0.05）；与对照组相比，氯胺酮组p-PI3K、p-AKT蛋白均显著降低(Plt;0.01)，LC3和becline-1蛋白均显著升高（Plt;0.01），L组p-PI3K和p-AKT均显著降低（Plt;0.01），beclin-1和LC3均升高（Plt;0.05），与K组相比，H组p-PI3K(Plt;0.01)和p-AKT升高（Plt;0.05），beclin-1显著降低（Plt;0.01），LC3降低（Plt;0.05），与L组相比，H组p-PI3K显著增多（Plt;0.01） 结论： 1.丁苯酞可以改善氯胺酮对发育期小鼠造成的神经毒性作用。 2.丁苯酞改善氯胺酮神经毒性的机制可能与PI3K/AKT通路激活，抑制自噬相关。 3.高剂量丁苯酞与低剂量丁苯酞在改善小鼠神经毒性方面未见显著异常。
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