摘要
鳕鱼是世界上重要的经济鱼类，年产量大，鱼肉多加工成鱼片销售，每年产生了大量的水产下脚料，如鱼皮、鱼骨等，未得到充分的利用，进而造成资源浪费。为了提高水产废弃物的高值化利用，本研究课题选用鳕鱼皮为原料，采用酸碱处理，热水提取的方法得到鳕鱼皮明胶，并对其进行鉴定和理化性质分析。将提取的明胶与海藻酸钠复配，在交联剂戊二醛的作用下，制备得到鳕鱼皮明胶复合止血敷料，并进一步研究其理化性能、微观结构、止血性能、止血机理和生物相容性，为开发一种新型的医用止血敷料提供理论依据及技术指导。 1.本文首先对鳕鱼皮原料的基本成分进行了分析，鳕鱼皮中粗蛋白含量丰富，为31.07±0.78%，粗脂肪、灰分等杂质含量较低。经酸碱处理，55℃下提取4h得到的鳕鱼皮明胶，粗蛋白含量为83.83±1.23%，粗脂肪等杂质得到了有效的去除。通过测定羟脯氨酸的含量计算出了该制备条件下明胶的提取率为39.33%；从SDS-PAGE电泳图中可以看出样品包含三条α链（α1，α2和α3）和β链，推断出样品是由Ⅰ型胶原蛋白水解得到的。整体电泳图条带清晰，不含杂带，说明样品具有较高的纯度。红外光谱具有典型的胶原蛋白吸收峰；紫外光谱显示样品在200nm处取得最大吸收；随着温度的升高，粘度逐渐降低；样品的凝胶强度为87.3±2.9g，低于陆生动物源明胶的凝胶强度。研究鳕鱼皮明胶的理化性质为制备稳定的明胶基医用敷料提供重要信息。 2.本文将提取的明胶与海藻酸钠复配，在交联剂戊二醛的作用下，制备得到复合止血敷料。研究了明胶浓度、海藻酸钠与明胶的复配比及戊二醛浓度这些制备复合止血敷料的主要参数，对抗张强度、断裂伸长率、吸水倍数、保湿率和交联度等理化性能的影响。经过正交试验优化，得到复合止血敷料的最优制备工艺为：明胶浓度为1%，复配比为8:15，戊二醛浓度为0.02%。此外，还发现了预冻温度、明胶浓度、复配比和戊二醛浓度对复合止血敷料微观结构的影响规律。通过控制制备参数，可以实现对敷料微观结构的调控。 3.建立了不同类型的活体动物出血模型，以市售明胶海绵和自然止血为对照，评价了鳕鱼皮明胶复合止血敷料的止血性能。结果表明复合止血敷料对大鼠股动脉止血、肝创面止血和断尾止血模型均具有较好的止血效果，止血时间分别为64±9s，108±4s，230±25s，肝创面止血量为0.2295±0.0729g，基本达到了市售明胶海绵的止血效果。从凝血途径和血小板活性因子释放量等方面初步探讨了复合止血敷料的止血机理。复合止血敷料能明显缩短活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶时间（TT），而对凝血酶原时间（PT）没有影响，说明其主要是通过影响内源性凝血途径和共同凝血途径来起到凝血的目的。此外，复合止血敷料还能增加血栓烷素B2（TXB2）、血小板第四因子（PF4）、P-选择素三种活性因子的释放量，进而刺激周围的血小板活化，促进纤维蛋白形成，加速止血。 4.本文按照国家标准GB/T16886医疗器械生物学评价要求，对鳕鱼皮明胶复合止血敷料的生物相容性进行评价。结果表明：与阴性对照组相比，复合止血敷料在全身急性毒性实验中未出现任何毒性症状；皮内刺激和破损皮肤刺激实验中均没有红斑水肿等皮肤刺激问题，平均原发刺激指数（APII）为0.22小于0.5，属于极轻微刺激性，表明对皮肤无致敏性；溶血率为1.51%，小于5%，符合国家医用材料的血液安全性标准；在肝脏相容性实验中，复合止血敷料体内降解良好，在植入后第8周时完全降解，伤口愈合情况较好，未出现严重的炎症反应，是一种具有良好生物安全性的医用敷料。
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