摘要
壳聚糖的羟丙基化是改善壳聚糖水溶性最有效的方法之一，从而拓宽了其在医药、纺织、造纸、废水处理等领域的应用。然而，至今尚未见确凿证据表明壳聚糖分子中羟丙基化的具体取代位点，这极不利于壳聚糖衍生物的合成设计及其后续相关取代度的质量控制。因此，本文制备了不同取代度的羟丙基壳聚糖（HPCS）以及先经过氨基保护后羟丙基化的HPCS，通过研究酸、温度对核磁图谱中溶剂（HOD）峰及各信号的影响，以推测羟丙基基团在HPCS中的取代位点，从而建立其不同取代位点的摩尔取代度（MS）、乙酰化度（DA）的测定方法，并为其在载药微球HPCS材料中的应用奠定基础。研究结果如下： （1）建立并优化了HPCS的样品制备方法及其MS的1HNMR测试方法。结果表明，随着DCl浓度的升高，HOD峰向低场呈线性移动，当其浓度大于1.91M时，可将HOD峰移动至不干扰HPCS特征峰位置；而升高温度可使HOD峰向高场呈线性移动，当温度在60~70℃时，HOD峰可不干扰HPCS特征峰。 （2）分别制备氨基保护的HPCS和未氨基保护的HPCS，并比对其1HNMR谱图，结果表明，5.12ppm（H1-N）、4.16ppm（H2''）和1.27ppm（H9-N）与氨基取代相关。 （3）利用1HNMR、13CNMR和1H-13CHSQC对HPCS进行结构解析，以HPCS样品中未添加DCl为对照，考察DCl对其谱图的影响，以全面探究羟丙基化的取代位点。结果表明，3.88/70.0ppm和3.89/76.4ppm，3.93、3.78/60.0和4.05~3.30/66.2ppm，4.13/63.0ppm分别为3位、6位、2位的取代位点。 （4）建立了1HNMR法测定总取代度、NH2-取代度、OH-取代度以及乙酰化度的计算方法，通过比较发现，“压水峰”并不适用于羟丙基壳聚糖的MS的定量计算。 （5）将经氨基保护的羟丙基壳聚糖成功地用于壳聚糖微球的制备，得到700nm的空白微球和550nm的载药微球，其包封率和载药量分别可达到71.77%和6.52%，24h释药量为78.85%。 综上，本文所建立的1HNMR法可成功地用于羟丙基壳聚糖的结构解析及取代度的测定，不仅如此，还可广泛应用于其它氨基糖类（尤其是壳聚糖及其衍生物）的结构解析及取代度的测定。通过氨基保护得到的HPCS成功地用于羟丙基壳聚糖微球的制备。
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