摘要
化疗是临床治疗恶性肿瘤的主要手段之一，大多数的化疗药物存在诸如水溶性差、半衰期短、毒副作用大等缺点。近年来，两亲性自组装纳米胶束因其能够增加药物水溶性、延长体内循环时间、降低药物的系统毒性以及通过肿瘤EPR效应实现靶向性等特点受到研究人员的广泛关注。本文通过对壳聚糖进行亲疏水改性，构建了一种pH敏感型的自组装纳米递送载体，对所构建纳米载体的理化性质、生物安全性、载药情况以及载药后体内外抗肿瘤效果进行了系统的研究，具体内容如下： 1.本研究将维生素E琥珀酸酯和组氨酸通过EDC·HCl缩合的方法接枝到壳聚糖的自由氨基上，构建了一种两亲性自组装纳米胶束——维生素E琥珀酸酯-壳聚糖-组氨酸。通过红外、核磁等表征手段证实维生素E琥珀酸酯和组氨酸成功接枝到了壳聚糖上，通过元素分析法计算出VES的取代度为3.20%，His的取代度为9.01%。将合成的两亲性自组装纳米胶束通过超声法制备成纳米粒子，考察其粒径、Zeta电位和微观形貌。结果表明VCH自组装形成的纳米粒子平均粒径在172.1nm，PDI=0.349，Zeta电位为+49mV，纳米粒呈球形或椭球形，分散均匀，无明显聚沉现象。对VCH纳米粒子进行细胞水平和动物水平的生物安全性评价。实验结果表明VCH纳米粒子在各浓度范围，对L929细胞没有明显的细胞毒性，细胞毒性评级为0级或1级。通过给KM小鼠尾静脉注射空白纳米粒的方法评价VCH纳米粒子的动物安全性，结果表明VCH纳米粒子并未造成小鼠脏器正常组织的损伤，生物安全性良好。 2.以阿霉素为模型药物制备了载药纳米粒子DOX/VCH，并测定了包封率和载药量。当药物与载体质量比为2:5时，测得药物包封率为66.64%，载药量可达21.04%。对载药纳米粒DOX/VCH的粒径和Zeta电位进行测定，发现载药纳米粒的粒径为260.2nm，比起空白纳米粒，平均粒径增大了90nm，PDI=0.121，Zeta电位为+38mV。通过扫描电子显微镜可以观察到载药纳米粒的微观形貌成球形，形态比空白纳米粒更加饱满。将载药纳米粒分别置于pH为5.7和7.4的PBS缓冲液中考察药物的释放情况，在pH=7.4的环境中药物累计释放量为18.6%，在pH=5.7的环境中为26.6%，表明载药纳米粒子DOX/VCH具有一定的pH敏感性。 3.选用HepG2细胞对载药纳米粒的IC50进行测定，载药纳米粒24h的IC50值为10.59μg/mL，DOX·HCl的IC50值为1.52μg/mL。体外抗肿瘤实验结果表明，24h时盐酸阿霉素的抗肿瘤效果要优于载药纳米粒DOX/VCH。通过激光共聚焦扫描显微镜观察HepG2肝癌细胞对载药纳米粒的摄取情况，结果表明HepG2肝癌细胞能够对载药纳米粒DOX/VCH进行有效摄取，盐酸阿霉素和载药纳米粒都是随着摄取时间的延长，摄取量增多，表现为红色荧光强度变强，说明二者的摄取均具有时间效应性。 4.在对荷瘤小鼠的治疗过程中，通过各组荷瘤小鼠体重变化发现，VCH纳米载体减弱了阿霉素对体重增长的抑制作用。肿瘤治疗结束后，给予载药纳米粒DOX/VCH的小鼠肿瘤抑制率为45.81%，给予盐酸阿霉素的小鼠肿瘤抑制率为52.74%。脏器指数结果表明，盐酸阿霉素组小鼠的肝、脾、肺具有一定程度的损伤，而载药纳米粒组小鼠的各个脏器与对照组相比没有显著性差异。通过Hamp;E染色的组织切片结果可以看出，盐酸阿霉素组小鼠的肝、脾和肾组织受到阿霉素的毒副作用比较大，表现为组织中出现空泡状变性或者有炎性细胞浸润，而载药纳米粒DOX/VCH组的小鼠组织切片上未观察到组织受损的迹象。 综上所述，本文设计的智能型两亲性自组装纳米载体生物相容性良好，通过自组装能够将抗肿瘤药物包封进疏水核心，形成稳定的载药纳米粒，载药量高。这种载药纳米粒子具有一定的缓释作用和pH敏感性，在体内的抗肿瘤效果优异，且具有明显降低药物毒性的作用，是一种具有潜力的智能型药物递送载体。
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