摘要
目的：研究意大利牛舌草总黄酮中发挥对心肌缺血/再灌注损伤（Ischemia/reperfusioninjury，MIRI）具有保护作用的活性成分，探讨其是否通过抑制NF-κB信号通路的活化，调节自噬水平、减少细胞焦亡、抑制心肌细胞凋亡、以及改善线粒体功能等方面减轻H/R损伤。方法：（1）建立缺氧/复氧体外模型，考察芦丁、迷迭香酸、水仙苷、山奈酚3-O-芸香糖苷和总黄酮预处理浓度和时间，采用CCK-8法检测原代心肌细胞存活率，酶标法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）水平、细胞内的丙二醛（MDA）含量和细胞内超氧化物歧化酶（SOD）的活力。（2）建立缺氧/复氧体外模型，用芦丁、迷迭香酸、水仙苷、山奈酚3-O-芸香糖苷、总黄酮筛选出的最佳干预条件和阳性药葛根素预处理，检测线粒体膜电位、心肌细胞凋亡、NF-κB信号通路关键蛋白，以及其介导的与凋亡、自噬、焦亡相关蛋白的表达。结果：（1）确定预处理的浓度和时间分别为50μg/mL芦丁干预3h、25μg/mL迷迭香酸干预3h、25μg/mL水仙苷干预3h、100μg/mL山奈酚3-O-芸香糖苷干预3h和50μg/mL总黄酮干预1h，各给药组较缺氧/复氧组能提高细胞存活率（P＜0.01）、降低LDH漏出量（P＜0.01）、减少细胞内MDA的含量（P＜0.01）且SOD活力显著性提高（P＜0.01），差异有统计学意义。其中，总黄酮对因H/R处理造成损伤的修复作用最为显著。（2）各组心肌细胞经历H/R后，给药组心肌细胞早期凋亡指数较缺氧/复氧组显著下降，线粒体膜电位提高（P＜0.01）。同时NF-κB信号通路关键蛋白的激活受到了抑制，代表凋亡的Bax/Bcl-2的比例较模型组明显降低（P＜0.01），焦亡蛋白Beclin-1蛋白表达量较模型组明显降低而p62表达上调（P＜0.01），给药组焦亡相关蛋白的NLRP3、IL-1β以及GSDMD较模型组明显降低（P＜0.01）。结论：意大利牛舌草总黄酮及其成分及四个单体化合物均能提高心肌细胞的活力，抵抗心肌细胞的过度氧化，增强SOD的活力；这种保护作用是缺氧/复氧前给药干预通过抑制NF-κB信号通路的激活，抑制心肌细胞的过度自噬，缓解细胞焦亡，减少心肌细胞凋亡，减轻H/R对心肌细胞造成的损伤。
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