摘要
近年来，随着免疫缺陷患者的增多、化疗药物的广泛使用，使得真菌感染率急剧攀升。目前临床上使用的抗真菌药物普遍存在着抗菌谱窄、毒副作用大、易出现耐药性等问题。因此，开发高效、低毒、广谱的新型抗真菌药物已成为药物研发者的一项重要任务。 角鲨烯环氧化酶（SE）和甾醇14α-去甲基化酶（CYP51）是真菌麦角甾醇生物合成通路中的关键限速酶，也是开发抗真菌药物的重要靶点。本论文主要围绕其进行目标化合物的设计、合成与活性研究工作，具体可以划分为以下三个部分： 第一部分：构建了基于SE抑制剂和CYP51抑制剂的药效团模型，选择恰当的有机活性片段进行匹配连接，以此设计合成3个目标化合物。体外抗真菌结果表明，目标化合物均能表现出一定的抗真菌活性，优选目标化合物8表现出高效、广谱的抗真菌活性。初步的机制研究表明化合物8能够引起羊毛甾醇含量（由抑制CYP51引起）和角鲨烯含量（由抑制SE引起）的增加，可能具有双靶标酶（SE/CYP51）抑制活性。以上结果验证了药效团模型的可靠性，为后续双靶点抗真菌抑制剂的设计与开发奠定了基础。 第二部分：通过对SE抑制剂和CYP51抑制剂的结构特征分析，发现两类抑制剂在核心区域存在相似性；在此基础上，基于双靶点特征，设计、合成了一系列芳酰胺类化合物及其衍生物（共24个化合物），并对其进行了活性测定。大多数目标化合物均能表现出良好的抗真菌活性，其中，优选目标化合物14b和13d对真菌及耐药真菌的抑制活性优于阳性对照药（萘替芬和氟康唑）。并且通过对真菌细胞膜的甾醇成分分析进一步证实了该类化合物具有双靶点协同抑制作用。此外，优选目标化合物14b和13d的动物体内研究表明它们的毒副作用较低，具有进一步开发的潜力。 第三部分：选择已报道的抗真菌抑制剂，通过提取活性片段的方式构建了抗真菌片段库，经由虚拟片段筛选途径优选出双靶点各关键活性区域的结合片段，再以片段组合连接的方式设计合成一系列芳烯酰胺类化合物及其衍生物（共24个化合物），随后对其进行活性测定。体外抗真菌测试结果表明，大多数目标化合物均具有抗真菌活性。特别是化合物32i和37i表现出优异的抗真菌活性，它们能够进入细胞内，引起真菌细胞裂解死亡。初步的机制研究证明该类化合物能够抑制双靶标酶（SE/CYP51）的活性，进而发挥协同抗真菌作用。同时，动物体内实验表明化合物32i和37i具有显著的体内抗真菌活性和较低的毒副作用。该部分研究表明运用片段组合的方式可以高效构建出新型双靶点抗真菌抑制剂。 综上所述，该课题研究为抗真菌药物的发现提供了新的设计思路，同时为解决真菌耐药性问题打下了重要基础。
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