摘要
腹腔和肌肉注射是疫苗接种通常采用的两种免疫途径，这两种免疫方式都能直接将疫苗递送给鱼体，快速地激活鱼体免疫系统，诱导较强的免疫应答反应。目前对于这两种免疫方式的研究大多停留在针对腹腔和肌肉免疫后鱼体特异性抗体的产生和免疫保护率的比较上，而在抗原摄入、基因表达和淋巴细胞活化增值等方面的比较研究却较少。本论文比较研究了腹腔和肌肉注射迟钝爱德华氏菌（Edwardsiellatarda）灭活疫苗后，牙鲆（Paralichthysolivaceus）各组织的抗原摄入动态，抗原呈递相关基因表达和sIgM+细胞比例变化的差异，同时通过多个免疫剂量组的比较，探讨了免疫剂量对两种接种方式的免疫效果影响。本研究结果将为深入探究鱼类免疫应答机制，优化免疫接种策略提供参考。具体的研究内容和结果如下： （1）腹腔和肌肉注射200μL三个浓度（107,108,109cfu/mL）的迟钝爱德华氏菌灭活疫苗免疫牙鲆后，利用绝对定量PCR技术检测牙鲆各组织的抗原摄入量，并通过间接免疫荧光技术观察抗原在组织上的分布。实验结果显示：①从各组织抗原摄入量达到峰值的时间来说：腹腔免疫组中牙鲆脾脏、头肾的抗原摄入量在6-9h达到峰值，肝脏和血液的抗原摄入量在9-15h达到峰值，鳃、后肠、皮肤和肌肉的抗原摄入量在15-36h达到峰值；肌肉免疫组牙鲆血液中的抗原摄入量在6-9h达到峰值，脾脏、头肾的抗原摄入量在9-15h达到峰值，肝脏、鳃和肌肉的抗原摄入量在15-24h达到峰值，皮肤和后肠的抗原摄入量在36h达到峰值。对比这两种免疫方式的结果我们可以发现：腹腔免疫组中牙鲆脾脏、头肾和肝脏中的抗原摄入量达到峰值的时间比肌肉免疫组中的早；肌肉免疫组中牙鲆血液的抗原摄入量达到峰值的时间比腹腔免疫组的早。②从组织的抗原摄入量差异来说：两种免疫方式下牙鲆各组织间的抗原量差异遵循相同的规律：脾脏和头肾中的抗原摄入量最多，其次是血液、肝脏和鳃，最少的是后肠、肌肉和皮肤。腹腔注射组的脾脏、头肾、肝脏、血液、后肠中的抗原摄入量峰值显著高于肌肉注射组；肌肉注射组的皮肤、肌肉中的抗原摄入量峰值显著高于腹腔注射组。③从疫苗注射剂量对两种免疫方式下各组织的抗原摄入量的影响来说：肌肉注射组中牙鲆各组织的抗原摄入量随着疫苗注射剂量的升高而升高，而腹腔免疫组中牙鲆脾脏和头肾的抗原摄入量呈现的规律为108cfu/mL组gt;109cfu/mL组gt;107cfu/mL组。 （2）腹腔和肌肉注射200μL三个浓度（107,108,109cfu/mL）的迟钝爱德华氏菌灭活疫苗免疫牙鲆后，分别采用相对定量PCR技术和流式细胞术检测牙鲆组织中抗原呈递相关基因（CD4-1,MHCIIα,CD8α、MHCIα）的表达水平和sIgM+细胞比例的变化。结果显示：腹腔免疫组中牙鲆脾脏、头肾、肝脏、后肠中的抗原呈递相关基因的表达量和脾脏、外周血中的sIgM+细胞比例均比肌肉免疫方式下的高。肌肉注射组牙鲆各组织中抗原呈递相关基因的表达水平和脾脏、外周血中sIgM+细胞比例都随着疫苗免疫剂量的升高而升高；而腹腔注射组的抗原呈递相关基因表达水平和sIgM+细胞比例变化受到了免疫剂量的影响，其在脾脏和头肾组织中呈现的规律为108cfu/mL组gt;109cfu/mL组gt;107cfu/mL组，而在其他组织中呈现的规律为109cfu/mL组gt;108cfu/mL组gt;107cfu/mL组。
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