摘要
猫杯状病毒（Felinecalicivirus,FCV）作为猫上呼吸道疾病的重要病原之一，在猫、狮、虎和豹等猫科动物上具有高度传染性。FCV感染一般呈急性、轻度和自限性，多以口腔溃疡、鼻分泌物增多和结膜炎为特征，有时还会造成慢性口炎。目前尚无特效抗病毒药物，主要通过疫苗进行预防。作为RNA病毒，FCV的基因组复制准确性不高，序列变异性和抗原变异性强，近年出现的FCV强毒变异株，更是加大了FCV的防控难度。因此，对FCV流行病学特点的研究和新型有效疫苗的研制显得尤为重要。本研究在调查探究杭州地区FCV流行病学的基础上，开展病毒的分离鉴定研究，了解分离株基因变异性及遗传进化特点，探讨疫苗对区域流行株的交叉保护性，为疫苗株的选择及疫苗的改进和研发提供参考，从而更好地防控FCV相关疾病。 本论文主要的研究内容和结果如下： 1.杭州地区FCV流行情况调查 为了调查杭州地区FCV的流行情况，本研究采集了杭州地区2018~2020年间表现临床症状猫的眼鼻口拭子样品共516份，经荧光定量PCR鉴定，其中222例呈FCV阳性，检出率为43.02%；其中113例正常免疫的病例中，检出FCV阳性30例（26.55%），表明即使正常接种疫苗也存在感染FCV的风险；统计分析年龄、品种、性别、季节、免疫情况和症状等不同因素与FCV感染的相关性，结果显示，FCV感染与免疫情况和口腔症状显著相关，按照免疫程序合理接种疫苗能够降低感染FCV的风险。 2.ORF2基因序列测定及遗传变异分析 为了探究杭州FCV分离株的遗传变异情况，本研究利用CRFK细胞分离培养FCV阳性样品中的病毒，分离得到共80株FCV病毒；扩增得到了76株分离株的ORF2基因序列，并结合国内外参考毒株序列对FCVORF2序列的遗传变异特性和遗传进化关系进行分析。结果显示，杭州分离株与国内外参考毒株的核苷酸序列一致度为72.2%~100.0%，氨基酸序列一致度为80.7%~100.0%。氨基酸序列比对分析表明，变异主要集中在C区和E区，部分抗原相关氨基酸位点存在变异。遗传进化分析显示，分离株与疫苗株FCV-255和F9均不在同一进化分支上，提示存在免疫失败的风险。 3.分离株HZ2020鉴定和基因组序列分析 为进一步了解杭州分离株与国内外毒株之间的遗传关系，本研究经免疫荧光鉴定毒株，并分段扩增、拼接得到全长为7687bp的基因组序列，命名为HZ2020。基因组全长核苷酸序列比对结果显示，HZ2020与28株参考毒株全长序列一致度为76.0%~81.2%。基于基因组及各阅读框序列的遗传进化分析结果表明，HZ2020与部分国内毒株遗传进化关系相近，形成了独立的大分支；与疫苗株FCV-255和F9序列一致度偏低，遗传亲缘关系较远。 4.猫群血清中抗FCV分离株抗体水平调查 为探究接种疫苗对猫群的保护效果，本研究选取了5株杭州地区分离株，分别测定病毒滴度，通过体外中和试验调查猫群血清中抗杭州分离株的中和抗体水平。结果显示，对于5株分离株，免疫组和未免疫组猫血清中抗体水平分布上均存在显著的差异，表明合理接种疫苗能够产生保护性中和抗体，但部分正常免疫猫体内的中和抗体水平未达到保护效价，应完善免疫接种程序，保证免疫接种效果。 综上所述，FCV在杭州地区广泛流行，分离株表现显著的遗传多样性，与疫苗株序列差异较大；疫苗株具有一定的交叉保护性，接种疫苗能够显著降低感染FCV的风险，但正常免疫的猫仍存在感染FCV的风险。本论文的研究对于了解杭州地区FCV的遗传变异情况具有一定意义，丰富了杭州地区FCV流行病学数据，为FCV疫苗毒株的筛选提供了理论依据。
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