摘要
羊子宫内膜炎是一种常见的产后疾病，引起子宫内膜炎发生的主要原因是病原微生物入侵机体。大肠杆菌作为主要的致病菌，入侵机体后会释放大量的脂多糖(LPS)，导致了子宫内膜炎的发生。目前，为大家公认的的治疗子宫内膜炎的方法是抗生素疗法，但抗生素的大量使用会引起“超级细菌”的出现。因此，寻找可以代替抗生素的药物来治疗子宫内膜炎已经成为当前研究热点。红花是一味传统中药，具有活血化瘀的作用，而羟基红花黄色素A(HYSA)是红花中主要的成分。本次研究的目的是探讨HYSA对LPS诱导的羊子宫内膜上皮细胞炎性反应的抑制作用，为临床上治疗子宫内膜炎提供依据。 本次研究中，采取羊子宫，通过组织块培养法获得子宫内膜上皮细胞，以不同浓度的LPS处理，确定引起炎性反应的LPS最佳剂量和作用时间。结果显示，LPS会抑制子宫内膜上皮细胞的增殖，抑制能力随着LPS浓度的升高而升高，且LPS浓度越高促进IL-1β、IL-8、TNF-α分泌的能力越强。50μg/mLLPS作用12h是诱导子宫内膜上皮细胞炎性反应的最佳条件。 通过CCK-8法检测HYSA对子宫内膜上皮细胞增殖的影响，确定后续试验的安全用药剂量。结果显示，80μg/mLHYSA促细胞增殖作用最好。以50μg/mLLPS作用12h，建立细胞炎性反应模型，用60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的HYSA处理子宫内膜上皮细胞，检测炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量以及p-ERK、P-JNK、p-p38MAPK蛋白的表达;检测炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达。结果表明，LPS作用12h后，TNF-α、IL-1β和IL-6的含量与对照组相比显著增加(P＜0.05);IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达与对照组相比极显著增加(P＜0.01);p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK蛋白的表达水平与对照组相比极显著促进(P＜0.01)。HYSA作用12h后，80μg/mLHYSA处理组IL-1β和IL-6的含量显著降低(P＜0.05);60μg/mL、80μg/mL、100μg/mLHYSA处理组，TNF-α的含量极显著降低(P＜0.01;HYSA作用12后，60μg/mL、80μg/mL、100μg/mLHYSA处理组，IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达量与对照组相比均极显著降低(P＜O.01);HYSA作用12h后，60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL处理组p-JNK、p-ERK蛋白的相对表达量与对照组相比极显著降低(P＜O.01);80gg/mL、100gg/mL处理组p-p38蛋白的相对表达量与对照组相比极显著降低(P＜0.01)。由上可知，HYSA可以降低TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌，TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA的表达以及p-p38、p-JNK、p-ERK蛋白的表达量，对羊子宫内膜上皮细胞炎性反应有抑制作用，HYSA最佳浓度为80μg/mL。 结论:组织块培养法可获得纯度较高的子宫内膜上皮细胞。50μg/mLLPS作用12h，可成功构建细胞炎性反应模型。80μg/mLHYSA对子宫内膜上皮细胞炎性反应的抑制作用最佳。
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