摘要
研究目的： 子宫内膜癌（Uterine Corpus Endometrial Carcinoma，UCEC）在世界上具有较高的死亡率。该病的发病因素有很多，比如肥胖、老化、初潮早、绝经晚、未产妇和绝经后雌激素治疗使用等。虽然很多病例在子宫内膜癌的早期就被诊断出来，但其中有一小部分患者预后较差，且有较高的复发和转移率。找到与凋亡相关的生物标志物来指示子宫内膜癌的预后非常重要。经过转录组芯片筛选基因的表达谱发现CKMT1B基因在子宫内膜癌及正常组织中差异表达。该基因是一种线粒体肌酸激酶，它可以促进肿瘤细胞生长以抵抗凋亡。CKMT1B表达的增加不仅发生在肝脏恶性病变时，也发生在胃癌、肺癌等预后不良的肿瘤中。近期人们发现CKMT1B可以作为一个独立的预后指标。因此，CKMT1B在子宫内膜癌中发病进展中的具体作用机制值得深入研究。研究目的： 1、探求CKMT1B在正常子宫内膜组织及癌组织和细胞中的表达差异； 2、实验通过siRNA干扰CKMT1B的表达和构建重组腺病毒ad CKMT1B使CKMT1B过表达研究子宫内膜癌的增殖、凋亡、和迁移侵袭能力发生的变化，并探讨CKMT1B基因在Ishikawa细胞中的调控机制。 研究方法： 1、运用R语言及生物信息学的方法从GEO数据库中获取临床子宫内膜癌样本进行统计学分析； 2、通过免疫组织化学实验（IHC）、实时逆转录－聚合酶链反应实验（RT-qPCR）和免疫印迹实验（Western blotting）比较CKMT1B在正常子宫内膜组织以及癌组织内的表达； 3、CKMT1B的下调及过表达后Transwell小室检测细胞侵袭，细胞划痕试验评估细胞迁移能力的变化； 4、CCK8实验、细胞克隆形成实验和免疫荧光法（immunofluorescence）检测CKMT1B下调及过表达后细胞的生长增殖能力的变化； 5、流式细胞术验证CKMT1B表达水平变化后对细胞凋亡的影响，同时利用试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）活力和ATP的产生，明确CKMT1B在其中的作用； 6、应用RT-qPCR和Western blotting检测CKMT1B敲低及过表达后，细胞内增殖、迁移、凋亡及侵袭的特征标志物基因的表达，并且检测AKT/mTOR信号通路蛋白的变化； 研究结果与结论： 1、CKMT1B在子宫内膜癌中高表达，并且与预后不良有关； 2、CKMT1B的表达下调能够抑制Ishikawa细胞的增殖、迁移和侵袭，促进细胞的凋亡； 3、CKMT1B的表达下调还可以抑制AKT/mTOR通路，并且同时影响ATP的产生，降低LDH酶活力； 4、CKMT1B过表达会影响Ishikawa细胞的生长增殖和迁移侵袭能力，并且会激活AKT/mTOR通路。
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