摘要
肉灵芝又称“太岁”，在我国有悠久的历史，目前有相关的报道和研究肉灵芝具有抗菌和提高机体免疫力的作用，不同来源地的肉灵芝不仅形态和功能各不相同，且不同环境发现的肉灵芝其体内的微生物类群及优势种群存在差异明显，所以其活性也不一定相同。本文对四川归朴有限公司提供的重量达900公斤的一种野生肉灵芝的浸泡水为研究对象，对其浸泡水进行理化测定，以期了解其有效组分，进行提取纯化分离，并探究肉灵芝浸泡水的抗炎活性特征，以期应用到抗炎保健食品及药品中。 1.肉灵芝浸泡水的理化测定及多糖的提取分离 苯酚-硫酸法测定肉灵芝浸泡水中粗多糖含量，NBT-Gly法测定肉灵芝浸泡水中吡咯喹啉醌(PQQ)含量，肉灵芝浸泡水进行元素分析，高效凝胶渗透色谱法对肉灵芝浸泡水精糖进行元素分析及分子量的测定；采用水提醇沉法提取肉灵芝浸泡水粗糖，Sevag法除去蛋白质，使用DEAE Sepharose Fast Flow交换柱色谱法对除去蛋白的精糖进行纯化分级，以备后续实验使用。 得到肉灵芝浸泡水中含有蛋白质、脂肪、低聚肽等活性物质，多糖含量为358.46±14.59?g/mL，PQQ含量为10.3±0.76?g/mL，肉灵芝浸泡水精糖的分子量为2.6×106Da，肉灵芝浸泡水精糖中含有N元素、C元素、H元素及S元素等。对肉灵芝浸泡水的多次提取纯化分离，透析后冷冻干燥得到5种样品分别是：4种多糖样品（肉灵芝浸泡水粗多糖、精糖、中性糖、酸性糖）和肉灵芝浸泡水蛋白质，加上产生肉灵芝浸泡水的组织块及浸泡水，共7种样品。 2.肉灵芝浸泡水多糖的体外细胞抗炎活性的验证 利用LPS（脂多糖）诱导巨噬细胞RAW264.7建立炎症模型，CCK-8法测定肉灵芝浸泡水不同处理方式得到的7种样品对细胞毒性的影响；使用CCK-8法测定LPS对巨噬细胞RAW264.7的毒性及细胞炎症模型的影响，使用ELISA检测肉灵芝浸泡水不同处理方式得到的多糖对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7培养基中NO及炎症因子（TNF-?、IL-1β、IL-10）含量的影响。 得到肉灵芝浸泡水不同处理方式得到的7种样品在0.01?g/mL-700?g/mL之间对巨噬细胞RAW264.7均无毒性，细胞炎性模型的最佳条件是1μg/mL LPS作用于巨噬细胞RAW264.724h；在该条件下，除肉灵芝浸泡水蛋白质外，得到肉灵芝浸泡水多糖样品均能够显著的降低LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7培养基中生成的NO及炎性因子TNF-?、IL-1β的含量，能够显著的提高抗炎因子IL-10的含量，证明肉灵芝浸泡水多糖在体外细胞水平具有抗炎效果。 3.肉灵芝浸泡水多糖的体内动物抗炎活性的验证 将SD大鼠分成空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、肉灵芝浸泡水多糖实验组，建立大鼠深Ⅱ度烫伤模型，在0h、12h、24h、3d、7d分别测定烫伤大鼠的血液指标，及血清中炎性因子（TNF-?、IL-1β、IL-10）的含量。 得到肉灵芝浸泡水不同处理方法得到的3种多糖样品（肉灵芝浸泡水粗糖、肉灵芝浸泡水精糖、肉灵芝浸泡水）能够显著的降低深Ⅱ度烫伤的大鼠血清的炎性因子TNF-?、IL-1β的含量，能显著的提高抗炎因子IL-10的含量，同时，能够显著降低单核细胞、中性粒细胞的数量，显著提高淋巴细胞的数量，3种肉灵芝浸泡水多糖在动物体内具有抗炎效果。
NETL