摘要
目的：非甾体抗炎药被广泛应用于治疗炎症反应，其中昔康类药物的疗效好且副作用小。非甾体抗炎药的作用机理主要是通过抑制环氧合酶的活性，阻碍IL-1β等相关炎症介质的产生，直接抑制炎症反应的发展。本研究旨在探究新型昔康类非甾体抗炎药XK02调控NF-κB信号通路介导的抗炎机制，并通过建立体内耳肿胀和足肿胀炎症模型验证其抗炎活性。 方法：采用MTT法检测细胞活力，筛选出XK02和美洛昔康的安全浓度范围，实验分为四组，分别为空白对照组，模型组，XK02组和美洛昔康组。通过LPS刺激建立体外炎症模型，Griess法检测NO含量，以及ELISA法、RT-PCR、WesternBlot检测环氧化酶、NF-κB通路蛋白、炎症因子的表达量变化。通过siRNA转染对细胞进行IκBα基因表达的敲低，或不同浓度的XK02处理，或XK02联合siRNA转染，然后对以上细胞进行相关蛋白和炎症因子的含量检测。使用二甲苯涂抹耳片建立小鼠耳肿胀模型和角叉莱胶注射建立小鼠足肿胀模型。通过不同浓度的XK02灌胃处理，观察小鼠耳部和足部的肿胀情况，计算出肿胀度及其肿胀抑制率，同时对小鼠的耳片和足跖组织进行Hamp;E染色，观察有无炎性细胞浸润，并检测血清中炎症因子的含量。 结果：通过ELISA和RT-PCR实验结果表明，XK02可以降低细胞内NO的含量，使炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度和mRNA水平均呈明显剂量依赖性降低。对于炎症因子COX-2的影响，XK02和美洛昔康的IC50值分别为37.02μg/mL和36.33μg/mL，表明XK02和美洛昔康对COX-2的抑制效果相当。在NF-κB信号通路方面，通过WesternBlot实验结果表明，IκBα和p65总蛋白表达不变，其磷酸化蛋白水平被XK02明显下调，阻断了NF-κB信号通路的激活。使用siRNA转染后，敲低IκBα能协作XK02(100μg/mL)下调IκBα、p65的磷酸化蛋白水平并抑制IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的转录水平。此外，就体内动物实验而言，XK02降低了耳肿胀和足肿胀模型小鼠的肿胀度，抑制了小鼠耳片和足跖组织中的炎症细胞浸润，使血清中炎症因子含量减少。 结论：体内外实验证实XK02具有一定抗炎作用，可以降低IL-6等炎症因子的含量，其作用机制可能是下调IκBα阻断NF-κB信号通路，产生抗炎效果。
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