摘要
海南素有“天然药库”之美誉。海南粗榧（CephalotaxushainanensisLi）是我国热区特有的珍稀药用植物，属于海南特有种。海南粗榧在同属植物中三尖杉酯类生物碱含有种类最多(共有11种)、含量最高，尤其是对动物和临床有显著抗肿瘤作用的4种三尖杉酯类生物碱，在海南粗榧中含量最高。这些生物碱作为原料药或重要原料药中间体在市场上极为紧缺、价格昂贵。原料药供需矛盾的现状亟待解决。 因此，通过有效途径获得高含量三尖杉酯类生物碱母核——三尖杉碱（Cephalotaxine），同时进行富集，再通过半合成获得高三尖杉酯碱等高活性一线抗肿瘤药物，可从根本上解决原料药短缺的问题，具有重要的现实意义。基于海南粗榧作为天然源抗肿瘤药源巨大的药用价值和经济价值，本论文拟通过生物碱的提取、富集与分离工艺熟化，实现海南粗榧的综合开发利用。本论文在建立海南粗榧中3种生物碱含量测定方法的基础上，对海南粗榧中主要生物碱的提取工艺进行了研究；并且通过单因素法研究了三尖杉碱的富集工艺，建立制备型高效液相色谱分离纯化三尖杉碱的方法并通过该方法成功分离纯化出三尖杉碱单体。主要研究内容如下： 1.基于液质联用技术，建立海南粗榧中3种生物碱(三尖杉碱、三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱)含量快速准确的测定方法。线性关系及方法学考察试验表明该方法较为准确可靠，可用于海南粗榧中3种生物碱含量的测定。 2.采用超声波辅助法提取海南粗榧中主要生物碱，在单因素试验的基础上通过响应面分析法优化并确定了海南粗榧中主要生物碱的最佳提取工艺。对影响海南粗榧中主要生物碱提取效果的溶剂种类、pH、原料粒径、提取次数、提取时间、提取温度、料液比、超声功率等8个因素分别进行单因素试验考察，确定了各因素的最佳取值范围。以料液比、提取时间、提取温度为考察因素，以海南粗榧中3种生物碱的提取含量为评价指标，通过响应面分析法优化出海南粗榧中主要生物碱的最佳提取工艺参数：溶剂为H2SO4（pH=1）、原料粒径为10目、料液比为1:70（g:mL）、提取时间为60min、提取温度为50℃、超声功率为480W、提取次数为4次。 3.基于海南粗榧三尖杉酯类生物碱（Cephalotaxusesters）部分母核相同的共识，通过碱性条件酯解断裂三尖杉酯类生物碱母核与酯碳支链共价键，获得高含量三尖杉碱，实现海南粗榧三尖杉酯类生物碱母核的快速、高效富集。对影响三尖杉碱富集效果的碱的种类、反应时间、KOH溶液浓度、反应温度等4个因素进行单因素试验考察，得到三尖杉碱最佳富集工艺参数：反应时间为10min、反应温度为室温（28℃）、反应所用碱为KOH、KOH溶液的浓度为0.1mol/L。 4.建立制备型高效液相色谱分离纯化三尖杉碱的方法，并通过该方法成功分离纯化出三尖杉碱单体。
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