摘要
遗传性先天性眼科疾病是遗传性疾病的重要组成部分,在所有的遗传性先天性眼科疾病之中，Usher综合征是一种较为常见的疾病，是人类一出生就丧失视力的重要病因之一。目前的研究发现，一共有16个致病基因可引起Usher综合征，Usher综合征最常见的亚型是Ⅱ型Usher综合征，在这16个致病基因之中，USH2A基因是Ⅱ型Usher综合征的主要致病基因。 本论文针对USH2A基因，对8名中国的Ⅱ型Usher综合征患者及其家属的USH2A基因进行了新突变的筛查。 目的：Usher综合征（USH)是人类遗传性耳聋和失明的最常见的原因。在各类USH中，Ⅱ型USH(USH2)是最常见的一类，而USH2A是USH2的主要致病基因，对患者基因致病突变的测序筛查是诊断其是否患有USH2的重要方法。为了扩大USH2A已知致病突变的范围，并进一步的揭示USH2A基因在USH2中所起到的作用，本研究对中国的USH2患者进行了USH2A基因突变的筛选。 方法： (1)本研究的对象选择了8名就诊于上海市第十人民医院的中国USH2患者，以及部分患者的直系亲属。所有患者家系的遗传模式均为单基因疾病常染色体隐性遗传。 (2)对所有患者进行仔细的临床检查，包括对患者进行光学相干断层扫描(opticalcoherencetomography,OCT)和视网膜电图（electroretinogram,ERG)等，以及对前庭功能的完整性和对感觉神经性听力障碍的诊断。 (3)在取得患者知情同意的前提下，采集患者及部分患者直系家庭成员的外周静脉血样本，并从中提取基因组DNA。 (4)设计能够特异性扩增基因编码区（外显子2-72)的引物，这些引物也可以扩增部分外显子区域附近的内含子区域，并使用聚合酶链式反应(PCR)进行扩增。使用Sanger测序方法进行全基因组外显子测序，研究等位基因并与NCBI数据库中的标准序列和200个正常人的对照进行比对。 (5)对于在患者身上筛查出的突变，使用PolyPhen-2,MutationTaster，SIFT和PROVEAN等预测软件对其所可能存在的致病性进行预测。 结果： (1)在患者的眼底照片中发现了视网膜血管减少和视网膜中存在不同程度不规则的色素团块等典型的视网膜色素变性（RP)特征，患者的OCT成像表明，其视网的膜厚度存在明显减少的现象。此外，患者均存在有中等程度至严重程度的听力障碍情况，其纯音听力图测试的分析结果显示，所有患者双侧气导和骨导听觉下降，鼓室图显示为As型，中耳传播系统活动受到一定程度的限制。其视网膜电图中无法检测到患者的ERG波振幅。 (2)共检测到26个USH2A基因外显子及其部分内含子上存在的变化，根据与正常人和NCBI数据库中的标准序列进行对比以及使用多种计算机突变位点致病性分析软件分析后，将在其中的5名患者的样本中发现的7个突变归类于可能具有致病性的突变，19个归类于可能不具有致病性的突变。 (3)在7个归类于可能具有致病性的突变中，4个突变是之前未报道过的致病的杂合突变，分别为：c.230dupA(Phe78Valfs*30),c.4085Cgt;T(p.Prol362Leu),c.4217Cgt;A(p.Serl406X)和c.11780Agt;G(p.Asp3927Gly)。3个为已经报道过的致病突变，分别为：c.8559-2Agt;G,c.8232Ggt;C和c.11389+3Agt;T。 (4)杂合的错义突变c.4085Cgt;T(p_Prol362Leu)也在001患者的母亲身上被发现；在002患者的父亲身上发现了剪接位点突变c.8559-2Agt;G;003患者的父亲身上携带有杂合的错义突变c.11780Agt;G(p.Asp3927Gly),而003患者的母亲身上携带有另一个致病的无义突变：c.4217Cgt;A(p.Serl406X)。 结论：在本研究中，我们鉴定了4个新的可能导致2型Usher综合征的杂合USH2A基因致病突变c_230dupA(Phe78Valfs*30),c_4085Cgt;T(p_Prol362Leu),c.4217Cgt;A(p.Serl406X)和c.11780Agt;G(p.Asp3927Gly)。并发现了三个已经报道过的USH2A基因致病突变c.8559-2Agt;G,c.8232Ggt;C和c.11389+3Agt;T。这一结果不仅扩大了目前已知的USH2A基因致病突变谱的范围，而且也为揭示USH2A基因有关致病突变导致先天性USH2的生物学机制提供了重要数据。为Usher综合征的分子生物学及分子遗传学研究、妊娠孕妇的产前检查与咨询以及USH2患者的基因治疗等提供了理论数据与参考。
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