摘要
扁桃属蔷薇科扁桃亚属植物，其果实富含营养元素，拥有重要的经济价值，是自交不亲和性果树作物，白花授粉不能正常结实，严重影响在生产过程中的产量产出，因此，探索扁桃的自交不亲和进程，既能加深对扁桃授粉结实生理的认识，又能帮助我们在实际生产中搭配合适的授粉品种，此外通过分子生物技术打破原有的自交不亲和，得到品质优良的自交亲和树种也是当前扁桃产业发展的重点。本研究以新疆喀什地区莎车县扁桃果树资源圃中的‘纸皮’扁桃为试验材料，采用同源克隆法克隆得到‘纸皮’扁桃自交不亲和SSK1基因，并详细分析了该基因的生物信息学特性，然后通过荧光定量、SouthernBlot印迹杂交、WesternBlot印迹杂交检测SSK1基因的表达情况，进而又继续构建了根癌农杆菌介导的矮牵牛遗传转化体系，试验结果如下: (1)利用同源克隆技术在‘纸皮’扁桃体内克隆获得了一个新的SSK1基因全长序列，命名为PsdSSKI(NCBI登录号为MT253627)，基因大小为585bp，含534bp的开放阅读框，C+G的含量为55.06％，翻译后的蛋白质有177个氨基酸，分子式是C910H1421N2330295s6，包括22个正电荷残基(Arg+Lys)和43个负电荷残基(Asp+Glu)，属亲水性蛋白，具有多个潜在的磷酸化位点，与来自蔷薇科物种的Skpl样蛋白具有更高的氨基酸同一性。 (2)利用三种试验技术对PsdSSK1基因进行表达检测，得到该基因在不同水平上的表达情况:荧光定量结果显示PsdSSK1基因在‘纸皮’扁桃的花粉中表达量最高，在叶片、花柱、花瓣及花萼中表达相对较低;Southern印迹分析得到PsdSSK1基因在花粉、花萼、花瓣中为单拷贝，在叶片、花柱中为双拷贝;Western印迹分析显示PsdSSK1蛋白在‘纸皮’扁桃的花瓣、花柱、花粉组织中均有表达，仅在花粉中强烈表达。 (3)为了构建矮牵牛组培体系，进行了激素浓度的筛选，最终确定了不同阶段最适宜的培养基配方:播种培养基为不含激素的MS培养基;不定芽分化培养基筛选为加入2.0mg/L6-BA与0.2mg/I.NAA的MS培养基;生根培养基筛选为加入0.1mg/LIBA的1/2MS培养基。 (4)成功获得‘纸皮’扁桃PsdSSK1基因的重组质粒pCAMBIA1301-35S-NOS-PsdSSK1，经冻融法转进根癌农杆菌内，采用叶盘法侵染矮牵牛，进行抗生素敏感性试验，确定75mg/L、400mg/L作为卡那霉素(Kan)和头孢霉素(Cef)的最佳使用浓度。最终经PCR检测，证明成功获得了转PsdSSK1基因的矮牵牛阳性植株。
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