摘要
目前，水产养殖业所面临的水质恶化、病害频发问题日益严重，为改善养殖水质，预防病害，研制绿色环保、安全高效的微生态制剂成为解决这一问题的关键。本研究比较了不同复合微生态制剂添加方式对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）生长、非特异性免疫能力、抗病力、肠道菌群结构和养殖水质中营养盐含量、异养菌总数、弧菌总数的影响，以期为对虾饲料研制中微生态制剂的合理添加、科学复配提供理论依据，并为凡纳滨对虾的养殖提供新的思路。 1、复合微生态制剂添加方式对凡纳滨对虾生长、非特异性免疫及抗病力的影响 以初始体重为2.66±0.02g的凡纳滨对虾为研究对象，探讨了不同复合微生态制剂添加方式对其生长、血清非特异性免疫酶活性及抗病力的影响。分别设计了4个处理组和1个对照组。其中，A为对照组，投喂对虾配合饲料，不添加任何微生态制剂；B为拌服复合菌制剂组；C为后喷涂复合菌制剂组；D为复合菌酶颗粒制剂组（复合菌与复合酶等复配后低温制粒）；E为微生态饲料组，即添加复合菌固体发酵培养物后制粒的配合饲料。每个处理组分别设3个重复，进行54天的养殖实验后采用浸浴法以副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）进行14天的攻毒实验。实验结果表明：（1）对虾养殖成活率均在90%以上，不同处理组间差异不显著（Pgt;0.05）。（2）除拌服复合菌制剂处理组外，其它处理均能显著提高对虾生长率（Plt;0.05)。（3）与对照组相比，各处理组均可不同程度提高对虾血清超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）、碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,AKP）、酸性磷酸酶（Acid Phosphatase,ACP）、溶菌酶（Lysozyme,LSZ）、总一氧化氮合酶（Total Nitric Oxide Synthase,TNOS）和诱导型一氧化氮合酶（Inducibe Nitric Oxide Synthase,iNOS）的活性。其中，微生态饲料处理组效果最显著，菌酶颗粒制剂处理组居次。（4）攻毒实验表明，除拌服液体复合菌制剂处理组外，其它处理组均能显著提高对虾成活率（Plt;0.05），其中以微生态饲料组效果最佳。综上可见，饲料中合理添加复合菌制剂、复合菌酶制剂及复合菌培养物均能促进凡纳滨对虾的生长，提高对虾血清的非特异性免疫酶活性，增强对虾对副溶血弧菌的抗病力，而以添加复合菌培养物的微生态饲料效果最佳。 2、微生态制剂添加方式对凡纳滨对虾养殖水体水质的影响 通过不同方式在凡纳滨对虾饲料中添加复合微生态制剂，比较研究不同复合微生态制剂添加方式对凡纳滨对虾养殖水体中氨氮、亚硝酸氮、硝酸氮、活性磷、总氮、总磷含量及异养菌总数、弧菌总数的影响。分别设计了4个处理组和1个对照组。其中，A为对照组，投喂对虾配合饲料，不添加任何微生态制剂；B为拌服复合菌制剂组；C为后喷涂复合菌制剂组；D为复合菌酶颗粒制剂组（复合菌与复合酶等复配后低温制粒）；E为微生态饲料组，即添加复合菌固体发酵培养物后制粒的配合饲料。每个处理组分别设3个重复，进行54天的养殖实验。实验结果表明：（1）与对照组相比，各处理组均能够不同程度的降低凡纳滨对虾养殖水体中的氨氮、亚硝酸氮、硝酸氮、活性磷、总氮、总磷含量及异养菌总数、弧菌总数。（2）与其它处理组相比，微生态饲料组和后喷涂复合菌制剂组降低氨氮、亚硝酸氮、硝酸氮、活性磷、总氮、总磷的效果最佳；拌服复合菌制剂组仅在养殖中期降低氨氮、亚硝酸氮、硝酸氮、活性磷、总磷含量，但总体效果与对照组差异不显著（Pgt;0.05）。（3）在降低养殖水体异养菌及弧菌含量方面，微生态饲料组效果最显著（Plt;0.05），复合菌酶制剂组次之，后喷涂复合菌制剂的作用效果在一定时间段明显优于拌服复合菌制剂。综上可见，饲料中合理添加复合菌制剂、复合菌酶制剂及复合菌培养物能够有效降低凡纳滨对虾养殖水体氨氮、亚硝酸氮、硝酸氮、活性磷、总氮、总磷的含量及异养菌总数和弧菌总数，而以添加复合菌培养物的微生态饲料效果最显著。 3、微生态制剂添加方式对凡纳滨对虾肠道菌群结构的影响 通过Illumina MiSeq高通量测序技术测定对虾肠道细菌16S rDNA的V3-V4区，比较研究不同复合微生态制剂添加方式对凡纳滨对虾肠道菌群结构的影响。本研究分别设计了4个处理组和1个对照组。其中，A为对照组，投喂对虾配合饲料，不添加任何微生态制剂；B为拌服复合菌制剂组；C为后喷涂复合菌制剂组；D为复合菌酶颗粒制剂组（复合菌与复合酶等复配后低温制粒）；E为微生态饲料组，即添加复合菌固体发酵培养物后制粒的配合饲料。每个处理组分别设3个重复，养殖周期为54天。测序结果表明：（1）在门分类水平各处理组主要优势菌门均为：变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、柔膜菌门（Tenericutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）。（2）在属分类水平上各处理组主要优势菌属均为：弧菌属（Vibrio）、鲁杰氏菌属（Ruegeria）和Candidatus-Bacilloplasma，但它们在各处理组中的相对丰度存在差异。弧菌属在拌服复合菌制剂组中为第一优势菌（47%）；与对照组（24%）相比，后喷涂复合菌制剂组（17%）和微生态饲料组（8%）弧菌属相对丰度均有所降低，复合菌酶制剂组（26%）有所上升。鲁杰氏菌属在后喷涂复合菌酶制剂组为第一优势菌（15%），其他3个处理组鲁杰氏菌属的相对丰度较对照组（7%）均有不同程度降低。（3）PCoA分析显示复合菌酶制剂组和微生态饲料组对虾肠道菌群与对照组相比均出现一定的特异性。Chao1指数、ACE指数、Shannon指数以及稀释曲线显示出复合菌酶制剂组、微生态饲料组和后喷涂复合菌制剂组均能够不同程度提高对虾肠道菌群的多样性和丰度。拌服复合菌制剂组肠道菌群结构多样性有所下降。（4）Network分析图显示Candidate-division-SR1、蓝藻门、变形菌门、厚壁菌门在对虾肠道菌群中起到关键作用。
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