摘要
叶黄素为具多重共轭双键的异戊二烯类化合物，结构极不稳定，易发生异构化、氧化和降解，同时，叶黄素的高疏水性严重影响其在人体内的吸收和生物利用度。通过构建纳米级稳态化运输载体输送疏水性物质是目前研究的热点。试验证明甜菊苷与叶黄素形成的纳米复合物显著促进了叶黄素的溶解度和生物利用度，但纳米颗粒的物化性质会影响纳米颗粒的肠道运输途径，其具体跨膜运输机制和有效生物学功能尚不明确。本研究采用体外消化模型、Caco-2细胞模型以及动物模型，探究甜菊苷包埋对叶黄素生物利用度以及跨膜转运特性的影响;通过外源给予H2O2（过氧化氢）诱导ARPE（人视网膜色素上皮细胞）氧化损伤作为眼部疾病模型，研究LUT-STE（叶黄素-甜菊苷复合物）对H2O2（过氧化氢）诱导的ARPE细胞的抗氧化的影响，并确定这种作用的潜在机制。主要研究结论如下: 1.通过体外消化模型和Caco-2细胞单层模型测定LUT-STE的生物可给率，表观渗透系数。结果显示，甜菊苷包埋能够促进叶黄素的生物可给率和跨膜吸收量。甜菊苷包埋后，叶黄素的生物可给率提高了6.71倍，比LM（胶束化叶黄素）高4.42倍;2h内LUT-STE的累积跨膜吸收量是LUT（叶黄素）的2.38倍。经EIPA、nystain、dynasore抑制剂处理后，nystain和dynasore显著降低了LUT-STE的细胞摄取量，分别为BLK（对照）的41.3％和57.7％，且LUT-STE的细胞摄取量显著低于LUT。进一步测定转运蛋白表达情况，LUT-STE处理的细胞中CD36、NPC1L1和PPARγ蛋白表达水平均显著高于BLK，PPARγ蛋白表达水平显著高于LUT，CD36和NPC1L1蛋白表达高于LUT，但没有显著差异。 2.通过单次饲喂小鼠LUT和LUT-STE探究甜菊苷包埋对叶黄素生物利用度及体内分布的影响。甜菊苷包埋促进了叶黄素的生物利用度，单次饲喂LUT-STE小鼠血浆中叶黄素的含量是LUT的1.6倍，小鼠各组织器官的叶黄素总量分别增加了0.2～0.6倍，且主要在肝脏和脾脏中积累。小鼠小肠中相关转运蛋白的表达测定结果表明，LUT-STE处理小鼠的CD36、NPC1L1、PPARγ蛋白表达水平均显著高于BLK，与LUT没有显著性差异。 3.通过外源性给予H2O2诱导ARPE细胞氧化损伤作为疾病模型探究LUT-STE的抗氧化作用机制。经800μM H2O2诱导后的ARPE细胞，细胞的存活率显著降低，ROS水平显著提高，细胞凋亡加速。ARPE细胞经5μg/mL LUT-STE预处理后，显著提高了细胞中SOD、CAT和GPx的含量，降低了细胞内ROS和MDA含量，并抑制了caspase-9蛋白表达和caspase-3激活，也抑制p53蛋白的表达，同时上调Bcl-2/Bax，进而抑制了H2O2诱导的细胞凋亡，提高了细胞的存活率。此外，LUT-STE可以抑制细胞外VEGF的产生，降低VEGF过渡表达。
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