摘要
皮肤作为人和动物最外层的重要屏障，时常会受到损伤。动物皮肤损伤时，需要机体调动精密而复杂的修复程序，才能使伤口重新愈合。在兽医临床中，动物的创伤往往伴发感染，而感染会加剧炎症反应，严重影响创口愈合。感染创治疗药物，需要在解决抗菌消炎问题的同时，还要能够加速愈合过程。抗菌促愈合药物的研究一直是研究的热点。 目前，感染创治疗主要使用抗生素，但随着抗生素的长期使用，细菌耐药性问题越来越严重。银尤其是纳米银可以与细菌作用，破坏其稳定性、影响遗传物质的合成，从而具有较强的抗菌作用。然而，由于纳米银的不稳定性，它的制备和存储过程常常需引入稳定剂和载体，这导致了纳米银的制备方法非常复杂。同时在制备时引入的试剂往往有细胞毒性，不利于纳米银的临床应用。壳聚糖作为一种药物载体具有与组织相容、无毒可降解、止血止痛、促愈合及抗菌等优点。当前研究表明壳聚糖与纳米银的联合应用可以增强抗菌效力，并且有效促进伤口愈合。可是，壳聚糖本身有水溶性差、机械强度低等缺陷。这会使得复合物在作用于动物体表创口时有组织刺激性，或无法有效地发挥其功能。因此，我们深入研究了一种高效治疗动物感染创的新型壳聚糖纳米银复合物。该复合物具有不刺激动物体表、制备方法简单、高效抗菌消炎和快速促进伤口愈合等显著优点，解决了传统纳米银复合材料的缺陷。 本试验通过化学修饰合成不同接枝率的邻苯二酚-壳聚糖(Catecholchitosan，CCTS)。用CCTS与AgNO3溶液直接反应，改变反应条件，得到多种邻苯二酚-壳聚糖纳米银(CCTS/Ag)溶胶。进行CCTS/Ag溶胶外观观察，定性表征纳米银及溶胶的理化性能。试验发现，CCTS/Ag溶胶最佳制备方法为:使用接枝率为9.93％的CCTS与2mg/mLAgNO3溶液在一定条件下反应30min后静置制得。TEM见CCTS/Ag溶胶中纳米银的粒径约在20nm，ICP-OES分析溶胶原液浓度为60.56μg/mL。 为检测CCTS/Ag溶胶的实际抑菌性和促愈合作用，本试验进行了体外抑菌试验和感染创动物模型治疗试验。在体外抑菌试验中记录最低抑（杀）菌浓度、抑（杀）菌率和抑菌时间。在动物试验中计算感染创的平均肉芽组织形成时间、平均创口完全愈合时间、创面面积愈合率及创口体积愈合率，并制作兔皮肤创伤处的HE染色及Masson染色组织切片。 抑菌试验结果表明，CCTS/Ag溶胶对铜绿假单胞菌的MIC为30.28μg/mL，抑菌率91.9％，MBC为48.44μg/mL，杀菌率100.0％，药物MIC下抑菌时间大于96h，对金黄色葡萄球菌的MIC为12.11μg/mL，抑菌率99.6％，MBC为24.22μg/mL，杀菌率100.0％，药物MIC下抑菌时间长达24h。CCTS/Ag溶胶对铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌均有长效抑菌能力。动物试验结果表明，CCTS/Ag溶胶用药期间未出现创周皮肤红肿、疼痛刺激、过敏等反应。CCTS/Ag溶胶组的创面面积愈合率(89.37％)和创口体积愈合率(97.50％)始终大于阴性对照组。CCTS/Ag溶胶组于4.17d最先发现肉芽形成，于11.33d最早完全愈合。观察组织切片，CCTS/Ag溶胶组炎性细胞浸润最轻微，毛细血管生出明显，最先观察到胶原纤维向心生长、上皮组织增殖和伤口重塑。以上试验结果表明，CCTS/Ag溶胶无明显刺激性，能有效抑菌消炎，高效地促进了肉芽形成和伤口收缩，从而加速愈合过程。
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