摘要
目的:建立一种新型的高通量体外筛选模型，以筛选与人源化PD1单抗具有协同作、用的新型抗肿瘤药物。 方法:运用人源化PD1小鼠C57BL/6J-Pdcd1em1(hPDCD1)与C57BL/6-Tg(TcraTcrb)1100M.jb/J小鼠杂交，构建C57BL/6-Pdcd1tm1(hPDCD1)Tg(TcraTcrb)双转基因小鼠，并扩大繁殖。利用慢病毒感染EL4、RMA、LL/2、B16F10、MC38hB7H1和Hepa1-6共六种细胞系，使其稳定表达萤火虫荧光素酶和OVA257-264肽段。分离hPD1/OT1小鼠脾脏的hPD1CD8+T细胞，以此为效应细胞，同时以稳定表达萤火虫荧光素酶和OVA257-264肽段的6种肿瘤工具细胞株分别作为靶细胞，构建共培养模型。 结果:成功构建了C57BL/6J-Pdcd1tm1(hPDCD1)Tg(TcraTcrb)转基因小鼠，其脾脏单个核细胞仅表达人PD1蛋白，而不表达鼠PD1蛋白，并可与全人源化的替雷利珠单抗结合发挥功能。六种工具细胞均稳定表达萤火虫荧光素酶，细胞数-荧光强度呈线性关系。共培养模型中，效应细胞可呈不同梯度的效应细胞-靶细胞比依赖杀伤靶细胞;在加入不同浓度的替雷利珠单抗后，可促进效应细胞杀伤肿瘤靶细胞;加入PembrolizumabscFV后，也可促进效应细胞杀伤肿瘤靶细胞。 结论:本研究所构建的体外共培养模型可用于筛选与人源化PD1单抗具有协同作用的新型药物组合。 目的:在NK-T细胞淋巴瘤小鼠肿瘤模型中，探索药物组合PD1单抗联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂罗米地辛相较于PD1单抗或罗米地辛单药能否增加抗肿瘤疗效，并优化给药方案及给药剂量。 方法:利用小鼠NK-T细胞淋巴瘤细胞系EL4，在转基因的人源化PD1小鼠中建立肿瘤细胞系移植模型，设置以下八组:罗米地辛0.33mg/kg、罗米地辛1mg/kg、PD1单抗10mg/kg、罗米地辛0.33mg/kg同步加PD1单抗10mg/kg、罗米地辛1mg/kg同步加PD1单抗10mg/kg、罗米地辛0.33mg/kg序贯PD1单抗10mg/kg、罗米地辛1mg/kg序贯PD1单抗10mg/kg组;记录各组小鼠肿瘤大小，绘制肿瘤生长曲线，计算肿瘤抑制率，观察体重及生存情况变化。同时，应用荧光定量PCR和免疫组化检测各组间效应分子的表达差异。利用小鼠NK-T细胞淋巴瘤细胞系RMA，在转基因的人源化PD1小鼠中建立肿瘤细胞系移植模型，设置以下四组:罗米地辛0.33mg/kg、PD1单抗10mg/kg、罗米地辛0.33mg/kg同步加PD1单抗10mg/kg;记录各组小鼠肿瘤大小，绘制肿瘤生长曲线，计算肿瘤抑制率，观察体重及生存情况变化。流式检测外周血CD8T细胞及PD1+CD8T细胞比例，肿瘤组织中CD4和CD8T细胞浸润情况。 结果:在EL4荷瘤小鼠模型中，无论在同步给药还是在序贯给药条件下，高剂量或低剂量的罗米地辛联合PD1单抗较PD1单药组均可显著抑制肿瘤生长，差异具有统计学意义;低剂量（1/3最大耐受剂量，maximumtolerateddose，1/3MTD）联合组相较罗米地辛单药可抑制肿瘤生长，但差异无统计学意义;高剂量(MTD)联合组较低剂量联合组显示相似的肿瘤抑制作用。同时，qPCR提示低剂量罗米地辛联合PD1单抗可诱导肿瘤组织中的T细胞趋化因子Ccl5、Cxcl9、Cxcl10、T细胞效应因子Ifn-γ、GranzymeB、及Pdl1mRNA表达升高，并诱导肿瘤组织PD-L1蛋白表达升高。在RMA荷瘤小鼠模型中，PD1单抗联合罗米地辛抗肿瘤疗效优于PD1单药，但与罗米地辛单药疗效相似。联合用药组外周血淋巴细胞比例减低，PD1阳性CD8T细胞比例较溶剂对照组升高，肿瘤组织中CD4和CD8T细胞比例也相应降低。 结论:PD1单抗联合罗米地辛治疗NK-T细胞淋巴瘤疗效优于PD1单药，但PD1单抗联合罗米地辛是否优于罗米地辛单药需要进一步的随机对照临床试验证实。
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