摘要
本人在攻读博士论文期间，在青岛市动物疫病预防控制中心工作，所以本课题结合青岛市动物疫病防控的需要，以禽流感流行病学调查研究为主，涵盖以下六个方面工作。 首先，在风险评估的基础上，对青岛市动物疫病流行病学监测调查体系进行评估分析，完善了青岛市动物疫病流行病学调查监测系统，制定了高致病性禽流感（HPAI）流行病学监测和调查方案。 第二，以测定流行率为目的，在青岛市开展了HPAI横断面调查，结果在青岛市HPAI免疫的蛋鸡群体中，发现有个鸡群感染了H5N2亚型HPAI病毒（H5N2qd14）。与常见的HPAI疫情不同，此感染鸡群临床上没有症状，也没有特征性的高发病率和高致死率。在国内首次证实高免鸡群也可发生HPAI的隐性感染。 第三，在确认感染HPAI后，开展了紧急流行病学调查和风险因素分析。结果显示本区域内养鸡场数量大、规模小、生物安全措施较差，养鸡场的家禽都免疫了针对H5亚型HPAI病毒第7.2分支的Re-4疫苗和针对H5亚型HPAI病毒第2.3.2分支的Re-6疫苗；血清抗体抽样检测显示本区域内养殖场的家禽针对这两个疫苗毒株的免疫抗体合格率在90%以上；病原学抽样检测未发现H5亚型HPAI病原学阳性。说明由上述阳性鸡群引起区域内发生疫病的风险较低，但再次发生输入性疫情的风险较高。 第四，对分离到的H5N2qd14病毒进行系统的实验室研究。①用无特定病原体（SPF）的鸡进行致病性试验，证实H5N2qd14具有高致病性；②对血凝素（HA）基因进行序列测定分析，结果显示该病毒裂解位点具有H5强毒典型的分子特征，与致病指数相符；③分子流行病学分析显示H5N2qd14分离株在分类地位上属于第7.2分支的H5强毒，与针对这个分支的Re-4疫苗毒株相比，在HA蛋白有47个氨基酸发生变异，其中有9个氨基酸位于抗原位点上，提示该病毒与Re-4疫苗毒株可能存在显著的抗原性差异；④用Re-4标准阳性血清、分离株制备的血清和养禽场采集的血清样品，采用不同的抗原进行交叉血凝抑制试验，进一步确认了H5N2qd14与Re-4疫苗毒株存在显著抗原性差异；⑤对H5N2qd14病毒分离株进行全基因组序列测定和分析，发现该病毒HA基因的受体结合位点没有发生易于结合到人型受体的突变，其PB2基因也未发生对哺乳动物毒力升高的突变，因此该病毒感染人等哺乳动物的可能性较小。该病毒NA基因没有发生针对奥司他韦的耐药性突变，但其M2基因发生了对金刚烷胺的耐药性突变。 第五，对H5N2qd14等近期中国分离的AIV毒株的全基因组进行遗传进化分析，发现本分离株的HA基因和M基因的两个基因组节段很可能来自近期H5N1亚型第7.2F分支的HPAI病毒，其余六个基因组节段很可能来自H9N2亚型低致病性AIV。对GISAID数据库中的H5N2亚型HPAI病毒全基因组进行谱系分析，结果发现中国H5N2亚型HPAI病毒可以分为两个HA分支（第7.2分支和第2.3.4分支）和六种基因型。H5N2qd14所在的基因型于2013年在其他两个省份也已经发现。这些数据提示H5N2亚型HPAI病毒在中国流行面较广。 第六，结合上述调查研究，对我国H5亚型HPAI防控策略进行了深入分析，提出我国H5亚型HPAI防控策略两条改进建议：首先，加强针对养禽者的宣传教育，提高他们生物安全意识；第二，加大对先进养禽模式和先进禽产品销售模式的财政扶持力度，从而提升家禽养殖和销售过程中的生物安全水平。这两条建议可以减少HAPI病毒等诸多禽类病原在家禽群体间的传播概率，是全球家禽业规模化发展必经之路，也是根除HPAI危害的必然选择。还建议结合全国禽流感监测结果，研究更新Re-4疫苗毒株的必要性。 综上所述，本课题在国内首次采用风险分析的流行病学理论，对青岛市动物疫病流行病学监测调查体系进行评估和完善，开展了系统的HPAI流行病学监测调查，发现青岛市HPAI免疫的蛋鸡群体中，存在一个没有明显临床症状的H5N2亚型HPAI病毒阳性鸡群，通过开展紧急流行病学调查和风险分析，证实病原没有发生扩散。对感染的病毒进行了系统的实验室研究，判定这是一起因为生物安全措施不到位和病毒抗原发生变异，由H5N2亚型HPAI病毒在免疫合格鸡群引起的隐性感染。进一步分析发现该亚型的HPAI病毒可能在我国存在范围较广，并且演变出较多的基因型。结合上述调查研究，对青岛市和我国H5亚型HPAI防控策略进行了深入分析，提出两条H5亚型HPAI防控策略改进建议和一条防控措施的建议。
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