摘要
自2014年以来，我国江苏、山东、河北等地商品肉鸭群出现了以雏鸭发育迟缓，上下喙萎缩，舌头外伸、肿胀、向下弯曲为主要特征的疾病，俗称为“鸭短喙与侏儒综合征”(Shortbeakanddwarfismsyndrome，SBDS)，给我国养鸭业造成了巨大经济损失。该病的病原为新型鹅细小病毒(Novelgooseparvovirus，NGPV)，也称为鸭源鹅细小病毒、新型鸭细小病毒等。目前，决定NGPV毒力的关键基因和NGPV跨种传播的原因尚不明确。 为获得一株NGPV减毒毒株，本研究将NGPVSD株在鸭胚上连续传至F50代，将F5代尿囊液与F50代尿囊液分别感染3日龄樱桃谷鸭进行致病性试验，观察感染后鸭的体重、喙长与排毒情况。与对照组相比，F5感染组体重在14dpi时呈极显著差异，喙长在7dpi时呈显著差异，14dpi时呈极显著差异，在3dpi时10只雏鸭均出现排毒;而F50感染组体重在14dpi时呈显著差异，21dpi时呈极显著差异，喙长在7dpi时呈显著差异，14dpi时呈极显著差异，在5dpi时10只雏鸭均出现排毒;综上所述，与F5代相比，F50代毒力明显减弱。 为探究影响NGPV毒力的基因位点，本研究对SD株F10、F20、F30、F40和F50进行了全基因组测序，经序列比对发现SD-F50突变的碱基位点涵盖了之前所有代次中突变的位点，将SD-F50与SD株进行碱基序列对比，发现在ITR区域中发生G26A、C61T、G320A、C355T突变，并于72、309位分别插入了碱基A和碱基T;在NS基F50与SD株的NS蛋白与VP蛋白氨基酸序列进行比较，在NS基因中，SD-F50相比较于SD株的突变为N225T，在VP基因，SD-F50相比较于SD株的突变为T465A、N703K;以上位点的改变或许会影响NGPV的毒力。 为进一步探究这些突变位点与致病力之间的关系，本研究构建了SD株的全长感染性克隆质粒。通过同义突变在基因组3807位引入遗传分子标记，消除NcoⅠ酶切位点，可后续用于区分拯救病毒与亲本病毒。将重组质粒同时转染鸭胚尿囊腔与卵黄囊途径拯救病毒，然后对其进行鉴定，将其命名为rSD。 本研究通过对NGPVSD株传代株进行全基因组序列分析，发现SD株基因组序列在鸭胚传代过程中发生了一些适应性突变，这些突变或许与NGPV的致病性和NGPV对鸭的适应性有关，为NGPV毒力的关键基因的研究提供了参考依据。同时NGPVSD株感染性克隆的成功构建也可为NGPV毒力因素与跨种传播研究提供技术支持。
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