摘要
为进一步挖掘现有养殖种类的生产潜力，以提高生产效率、降低生产成本，本研究以珍珠龙胆石斑鱼（Epinepheluslanceolatus♂×E.fuscoguttatus♀）为实验材料，研究了循环低温处理对其生长、能量收支、体成分、消化、代谢和生长相关基因表达的影响。同时，为进一步探索益生菌的促生长和提高免疫力等功能，研究了蜡样芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、酪酸菌及其复合菌对其生长、消化和非特异性免疫的影响，研究内容和主要研究结果如下： 1循环低温处理对珍珠龙胆石斑鱼生长、能量收支和生长相关基因表达的影响 实验设定了2个温度梯度，分别为22℃（低温）和28℃（恢复温度），设计了9个处理组（L1R3，L1R7，L1R11，L2R6，L2R14，L2R22，L4R12，L4R28，L4R44），其中低温处理时间为1，2，4天，恢复时间分别为低温处理时间的3，7，11倍，对照组（C）为在恢复温度养殖96天，养殖周期为96天。结果表明，L4R28处理组石斑鱼的末体重、相对增重率和特定生长率均显著高于对照组（Plt;0.05），而其他处理组与对照组相比差异不显著（Pgt;0.05）。同时，L4R28组石斑鱼的食物转化效率和表观消化率也显著高于对照组（Plt;0.05）。L2R14，L2R22，L4R12，L4R28和L4R44组鱼体粗蛋白含量显著高于对照组（Plt;0.05）。能量收支分析结果表明，同对照组相比，L4R28组石斑鱼的生长能占摄食能比例较高，而排泄能占摄食能比例较低（Plt;0.05）。此外，循环低温处理显著影响石斑鱼肝脏和肌肉中IGF1、IGF2b、IGFBP2a和IGFBP4等基因的相对表达水平，表明其内分泌和自分泌或旁分泌的类胰岛素生长因子（IGFs）均在适应低温处理的过程中发挥了调节作用。L4R28组石斑鱼的以上四个基因相对表达水平均显著上调，这也从内分泌角度揭示了L4R28组石斑鱼出现过度补偿生长的原因。研究结果证实循环低温处理可以诱导珍珠龙胆石斑鱼出现补偿或过补偿生长，其中低温22℃养殖4天，28℃恢复28天的循环模式可通过提高石斑鱼的表观消化率、食物转化效率、能量效率及生长相关基因的表达，使其实现过补偿生长。此养殖技术可能对珍珠龙胆石斑鱼的室内养殖具有重大应用价值。 2循环低温处理对珍珠龙胆石斑鱼肠道形态结构、消化酶活性和抗氧化水平的影响 本文研究了循环低温处理对珍珠龙胆石斑鱼肠道形态结构、消化酶活性和抗氧化酶活性的影响。结果表明，L4R28组石斑鱼中肠黏膜褶皱高、黏膜褶皱宽和肌层厚度均显著增加（Plt;0.05）。L1R3、L2R6和L4R12组石斑鱼胃蛋白酶活性显著低于对照组（Plt;0.05），而L1R11、L2R14和L2R22处理组胃蛋白酶活性显著高于对照组（Plt;0.05）；所有处理组石斑鱼肠道不同部位胰蛋白酶活性均显著高于对照组（Plt;0.05）；L4R28组石斑鱼前肠脂肪酶活性显著高于对照组和其他组（Plt;0.05），L1R11组前肠脂肪酶活性显著高于对照组（Plt;0.05），L2R14和L2R22组中肠脂肪酶活性显著高于对照组（Plt;0.05），所有处理组石斑鱼后肠脂肪酶活性均显著高于对照组（Plt;0.05）；除L4R12处理组之外，所有处理组石斑鱼前肠淀粉酶活性均显著高于对照组（Plt;0.05）；L1R11、L2R6、L2R14、L2R22和L4R28组石斑鱼中肠淀粉酶活性均显著高于对照组（Plt;0.05），而L1R3和L4R12组中肠淀粉酶活性显著低于对照组（Plt;0.05）；L4R28组石斑鱼后肠淀粉酶活性显著高于对照组（Plt;0.05），而L1R3和L4R12组后肠淀粉酶活性显著低于对照组（Plt;0.05）。L1R11组石斑鱼肝脏SOD活性显著高于对照组（Plt;0.05），L2R6组SOD活性显著低于对照组（Plt;0.05）；L1R3、L1R7、L2R6和L4R12组石斑鱼肝脏CAT活性显著低于对照组（Plt;0.05）；L2R14和L2R22组石斑鱼肌肉SOD活性显著高于对照组（Plt;0.05），L1R3组SOD活性显著低于对照组（Plt;0.05）；L1R3和L4R12组珍石斑鱼肌肉CAT活性与对照组相比无显著差异（Pgt;0.05），而其它组CAT活性均显著高于对照组（Plt;0.05）。总之，不同循环低温处理模式对珍珠龙胆石斑鱼的消化酶活性、中肠形态结构和抗氧化酶活性产生不同程度的影响。相对于其它处理模式，L4R28组石斑鱼的消化能力和抗氧化能力均处于较佳水平，能够促进鱼的生长和适应能力，可能是比较适宜的处理模式。 3循环低温处理对珍珠龙胆石斑鱼形态学参数、血液指标和糖代谢关键酶活性的影响 本文研究了循环低温处理对珍珠龙胆石斑鱼形态学参数、血液指标和糖代谢关键酶活性的影响，旨在评价不同模式下珍珠龙胆石斑鱼的生理健康状况，揭示其适应机制，筛选较好的处理模式。结果表明，L1R7和L1R11组鱼体肥满度（CF）显著高于对照组（Plt;0.05），L4R12组石斑鱼的肝体比显著高于L4R28组（Plt;0.05）；L1R7、L1R11和L4R28组石斑鱼血液中红细胞个数与对照组之间无显著差异（Pgt;0.05），L4R28组白细胞个数显著多于对照组（Plt;0.05），L1R3、L2R6、L4R12和L4R44组白细胞个数显著少于对照组（Plt;0.05），L1R3、L1R7、L2R6和L4R12组红细胞容积显著低于对照组（Plt;0.05），L1R3和L4R12组血红蛋白含量显著低于对照组（Plt;0.05）；除L2R14、L2R22、L4R28和L4R44组石斑鱼血浆总蛋白含量与对照组无显著差异（Pgt;0.05）外，其余组血浆总蛋白含量均显著低于对照组（Plt;0.05）；所有处理组石斑鱼血浆甘油三酯和胆固醇含量均显著降低（Plt;0.05），而血浆葡萄糖含量无明显变化（Pgt;0.05）；L1R3、L2R6和L4R12组石斑鱼肌肉粗蛋白含量显著低于对照组（Plt;0.05），L2R22和L4R44组肌肉粗脂肪含量显著高于对照组（Plt;0.05），L1R11和L4R28组肌肉糖原含量与对照组无显著差异（Pgt;0.05）；L1R3、L2R6和L4R12组石斑鱼丙酮酸激酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性显著低于对照组（Plt;0.05），所有处理组石斑鱼的磷酸果糖激酶活性均显著低于对照组（Plt;0.05），而己糖激酶、果糖-1,6-二磷酸酶和葡萄糖-6-磷酸酶活性与对照组之间无显著差异（Pgt;0.05）。综上所述，L4R28处理模式可能是比较适宜的处理模式，对珍珠龙胆石斑鱼的代谢和健康影响最小，而L1R3、L2R6和L4R12处理模式可能对石斑鱼的代谢产生抑制作用，最终影响其生长。 4添加酪酸菌对珍珠龙胆石斑鱼生长、消化酶活性和血清非特异性免疫的影响 酪酸菌（Clostridiumbutyricum）是近年来新开发的益生菌菌种，具有多种重要的生理功能，但目前在水产动物中的研究相对较少。本文初步研究了饲料中添加不同浓度的酪酸菌CBYG01对珍珠龙胆石斑鱼生长、消化酶、血清抗氧化酶和溶菌酶活性的影响。以基础饲料为对照组，在基础饲料中分别添加浓度为1×107cfu/kg（CB1组）、1×109cfu/kg（CB2组）、1×1011cfu/kg（CB3组）的酪酸菌活菌菌体以及1×109cfu/kg（CBM组）的酪酸菌发酵液。石斑鱼初始体重为（42.91±1.47）g，养殖60天后，分别测定其生长、消化酶活性以及血清超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、溶菌酶（LSZ）活性等指标。 5三种益生菌及其不同组合对珍珠龙胆石斑鱼生长、消化酶活性和血清非特异性免疫影响的比较研究 本文研究了蜡样芽孢杆菌（BacilluscereusBC-01），嗜酸乳杆菌（LactobacillusacidophilusLAG01），酪酸菌（ClostridiumbutyricumCBG01）及其不同组合对珍珠龙胆石斑鱼生长、消化酶活性和血清非特异性免疫的影响。研究以基础饲料为对照组（CT），在基础饲料中分别添加1.0×109cfu/kg的蜡样芽孢杆菌（Bs），1.0×109cfu/kg的嗜酸乳杆菌（Ls），1.0×109cfu/kg的酪酸菌（Cs），复合菌为等比例添加分别为1.0×109cfu/kg（BLC1），2.0×109cfu/kg（BLC2），3.0×109cfu/kg（BLC3）的三种菌。结果表明，Ls和BLC3组石斑鱼的末体重、特定生长率、摄食量、食物转化效率和表观消化率以及胃蛋白酶和肠道胰蛋白酶活性均显著高于对照组（Plt;0.05）。除了Cs和BLC1组，其他组石斑鱼的前肠淀粉酶和脂肪酶活性显著升高（Plt;0.05）。除了Cs组，其他组石斑鱼的后肠脂肪酶活性也显著升高（Plt;0.05）。同时，所有处理组石斑鱼的血清超氧化物歧化酶活性，Ls和BLC3组的溶菌酶和过氧化氢酶活性，以及除了Cs外其他组的谷胱甘肽过氧化物酶活性均显著提高（Plt;0.05）。综合以上指标，认为在珍珠龙胆石斑鱼饲料中添加浓度为1.0×109cfu/kg的嗜酸乳杆菌以及等比例添加浓度为3.0×109cfu/kg蜡样芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和酪酸菌效果较好。
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