摘要
蛹虫草类胡萝卜素是近年来发现的新型水溶性类胡萝卜素，研究发现其有较强的着色能力以及抗氧化、抗肿瘤、抑菌等功效。理论上水溶性类胡萝卜素具有比脂溶性类胡萝卜素更高的生物利用度，因此，蛹虫草类胡萝卜素在食品、医药、化妆品、纺织业等领域都具有广阔的开发和应用前景。为开发一种成本低、效率高、条件温和、操作简便、节能环保的蛹虫草类胡萝卜素分离纯化方法，作者针对目前鲜有报道的蛹虫草类胡萝卜素酶法提取和薄层色谱（Thin Layer Chromatography,TLC）纯化方法展开研究。此外，由于目前普遍使用蛹虫草类胡萝卜素粗提液进行稳定性研究，作者针对该问题研究确立了蛹虫草类胡萝卜素粗提液的等电点沉淀提纯法，并用该法处理后的粗提液进行蛹虫草类胡萝卜素稳定性研究。研究内容和结果如下： 1.蛹虫草类胡萝卜素酶法提取工艺的建立。经过实验对比，脂肪酶辅助提取蛹虫草类胡萝卜素效果最好，优化得到该酶辅助提取蛹虫草类胡萝卜素工艺条件为：蛹虫草子实体粉与水1:4(m:v)混匀，加入1%脂肪酶，于pH8，50℃条件下酶解30min；于室温下加入乙醇将酶解液乙醇浓度调至60%，浸提90min；离心收集上清液得到蛹虫草类胡萝卜素粗提液。用该工艺条件提取1次得到的蛹虫草类胡萝卜素含量为1747.8±17.6μg/g，显著高于以乙醇-水溶液为溶剂的超声辅助提取法得到的蛹虫草类胡萝卜素含量。表明酶法提取蛹虫草类胡萝卜具有替代超声辅助提取法的潜力。 2.蛹虫草类胡萝卜素TLC纯化法的研究。研究结果表明，配比为0.5%乙酸水溶液:乙醇:正丁醇:乙酸乙酯=12:8:24:36的展开剂能将蛹虫草类胡萝卜素展开成间隔清晰、无拖尾的4个条带。经HPLC对比分析，4个条带的溶出液在出峰时间和顺序上与文献报道的四种蛹虫草类胡萝卜素Cordyxanthin-Ⅰ、Cordyxanthin-Ⅱ、Cordyxanthin-Ⅲ、Cordyxanthin-Ⅳ分别一一对应，峰面积百分比分别为：76.10%，95.90%，97.96%，81.53%。由此推测，分离得到的四个条带可能是文献报道的这四种蛹虫草类胡萝卜素。这一推测有待进一步验证，但从实验结果看，TLC法纯化蛹虫草类胡萝卜素操作简单、试剂消耗少、分离快速直观、条带清晰，为今后蛹虫草类胡萝卜素纯化的研究提供方法参考。 3.蛹虫草类胡萝卜素稳定性的研究。通过实验得到蛹虫草类胡萝卜素粗提液等电点沉淀法提纯的最佳pH值为8。对等电点沉淀法处理后的蛹虫草类胡萝卜素粗提液进行稳定性研究，结果表明：蛹虫草类胡萝卜素对光照、高温、酸性环境以及Ca2+，Zn2+，Fe3+，Fe2+稳定性差。在蛹虫草类胡萝卜素的提取、纯化、加工、贮藏和应用过程中，应避光，保持较低温度，确保pH处于中性或弱碱性，可添加钠盐、钾盐、碱性抗氧化剂进行增色护色，要避免加入钙盐、锌盐、铁盐，避免使用铁质器具接触或盛装蛹虫草类胡萝卜素。
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