摘要
中医药学是我国一个伟大的宝库，而经典名方是中医药学的核心璀璨代表。经典名方复方制剂的研发是继承和发展中医药学的关键，《古代经典名方关键信息表（7首方剂）》等相关文件的公布，使经典名方研发的部分核心问题得到了解决，有力的推动了经典名方研发进程。 目的： 1.确定黄连汤物质基准制备方法，通过多批次物质基准制定其质量标准； 2.确定现代制备工艺进行初步放大实验，探究黄连汤颗粒制剂工艺，并制定黄连汤颗粒质量标准，以期为经典名方黄连汤深入研究开发奠定实验基础。 方法： 1.文献考证： 通过古籍考察，对处方来源、历史沿革、方义衍变、本草基原等进行确证。 2.物质基准制备及质量评价： （1）依据文献考证及相关文件确定15批黄连汤物质基准制备方法，将物质基准进行真空冷冻干燥，得到物质基准冻干粉（以下称对应实物），并进行水分、浸出物等测定。 （2）参照《中国药典》2020版（以下简称《药典》）相关规定，探究物质基准对应实物薄层专属鉴别方法，建立物质基准对应实物UPLC指纹图谱方法，并进行15批次物质基准相似度评价，测定多指标成分含量，分析其量值传递情况。 3.制剂工艺研究： 参照物质基准质量评价指标，以正交方法筛选出现代煎煮工艺参数，验证煎煮工艺并放大试验，经喷雾干燥并进行干压制粒，初步筛选出最佳制剂工艺。 4.黄连汤颗粒质量标准： 按照物质基准质量评价方法对黄连汤颗粒进行TLC、UPLC质量分析，依据《药典》四部通则相关要求进行颗粒剂项目检查，制定黄连汤颗粒质量标准。 5.初步稳定性研究： 采用加速稳定性试验对黄连汤颗粒进行初步稳定性研究。 结果： 1.文献考证： 确定黄连使用“味连”（CoptischinensisFranch.）；甘草使用“豆科甘草”（GlycyrrhizauralensisFisch.），炮制方法为清炒（以下称炒甘草）；桂枝所用为现代肉桂（以下称肉桂）；半夏使用清半夏饮片（以下称清半夏），其余药味基原情况皆同《药典》相应品类。所用剂量为1两13.8g，半升半夏为34.5g，大枣一枚去核2.5g，一斗为10L，1L为200mL。 2.物质基准制备及质量标准研究： （1）取黄连41.4g，肉桂41.4g，干姜41.4g，炒甘草41.4g，清半夏34.5g，人参27.6g，大枣（去核）30g，加水2000mL，武火500瓦特（W）煮沸，文火300W微沸保持约90min，400目筛过滤，得煎液1200g即为黄连汤物质基准。 （2）15批物质基准煎液平均出膏率为18.23%，对应实物平均含水率为6.52%、平均浸出物为45.74%。 （3）物质基准对应实物中黄连、肉桂、干姜、炒甘草、人参、清半夏、大枣的薄层鉴别方法专属性好；建立了两种UPLC指纹图谱方法，同时进行了多指标成分含量测定，方法学考察均较好。 （4）对黄连汤物质基准UPLC-PDA指纹图谱共标定了26个共有峰，指认了13个专属峰，15批物质基准指纹图谱相似度均＞0.92，11种成分含量测定加样回收率均在95%~105%范围内；15批物质基准对应实物含量分别为：木兰花碱1.65~2.477mg·g-1、黄连碱11.48~16.77mg·g-1、表小檗碱2.21~3.19mg·g-1、非洲防己碱1.20~1.65mg·g-1、药根碱1.03~2.18mg·g-1、小檗碱13.58~23.29mg·g-1、巴马汀3.46~4.69mg·g-1、桂皮醛1.61~6.67mg·g-1、6-姜辣素0.83~1.46mg·g-1、甘草苷1.61~4.52mg·g-1、甘草酸2.14~6.74mg·g-1。从饮片到物质基准的转移率：黄连碱55.00%~94.56%、表小檗碱20.74%~35.13%、小檗碱19.44%~40.76%、巴马汀21.22%~30.97%、桂皮醛3.91%~19.44%、6-姜辣素9.93%~18.06%、甘草苷20.81%~53.28%、甘草酸10.01%~32.42%。 （5）对黄连汤物质基准UPLC-ELSD指纹图谱共标定了12个共有峰，指认出6种成分。15批物质基准相似度＞0.897，3种成分含量测定加样回收率均在90%~110%，15批物质基准对应实物人参皂苷Rg1含量0.61~0.99mg·g-1、人参皂苷Re含量0.47~1.00mg·g-1、人参皂苷Rb1含量0.53~0.80mg·g-1，人参皂苷Rg1与人参皂苷Re之和从饮片到物质基准的转移率范围为36.86%~76.82%、人参皂苷Rb1从饮片到物质基准的转移率范围为32.49%~60.03%。 3.制剂工艺研究： 以黄连汤现代煎煮工艺正交筛选方法，即“10倍加水量、浸泡0.5h、煎煮2次、每次沸腾0.5h”制备煎液，减压浓缩至约总煎液量1/4[ρ=1.026g·cm-3（20℃）]，直接进行喷雾干燥，得喷雾粉进行干压制粒，以双筛法测定成型率不低于65%，颗粒剂相关检查结果良好。 4.颗粒剂质量标准： （1）按照物质基准各药味薄层鉴别方法对黄连汤颗粒进行鉴别，除桂皮醛在制粒过程挥发损失外，其余成分专属鉴别结果同物质基准。 （2）黄连汤颗粒每袋（10g）含量不少于：木兰花碱13.63mg、黄连碱91.75mg、表小檗碱19.55mg、非洲防己碱9.75mg、药根碱9.97mg、小檗碱132.29mg、甘草苷17.85mg、甘草酸29.05mg、巴马汀29.97mg、6-姜辣素7.73mg、人参皂苷Rg1与人参皂苷Re总量10.42mg、人参皂苷Rb14.61mg。 5.初步稳定性研究： 经过6个月的加速稳定性试验考察，黄连汤颗粒各指标均符合初拟定质量标准要求，确定其贮藏温度不超过40℃，湿度不超过75%，室温下有效期至少为24个月。 结论： 本研究制定了稳定的黄连汤物质基准制备工艺和质量标准，运用TLC对多批次物质基准中黄连、肉桂、干姜、炒甘草、人参、清半夏、大枣进行鉴别，专属性良好；建立的指纹图谱可较好的表征黄连汤特征成分有效控制各环节的质量；还结合现代工艺制备出黄连汤颗粒剂，其各检查项目结果均良好，为经典名方黄连汤复方制剂深入研究开发奠定实验基础。
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