摘要
癌症是一类源于遗传和表观遗传改变的疾病。然而，由于肿瘤细胞和分子标志物的数量少，在癌前和早期阶段对癌症的检测是有限的。越来越多的纳米药物递释系统(NDDS)已经被研究用于肿瘤治疗。这些纳米粒子可以通过增强渗透和滞留效应(EPR)被动靶向至癌变部位，然而，被动肿瘤靶向给药系统的治疗效果远非最佳，并且不能满足日益增长的现代医学需求。因此，迫切需要开发新型给药系统，以实现治疗药物靶向给药。本文旨在以具有生物相容性和生物可降解性的聚磷酸酯和葡聚糖为聚合物载体，以CD147单克隆抗体为靶向分子，设计了两种载药纳米粒子靶向递送药物至肝癌细胞，本论文主要分为以下两个部分: 1.CD147单抗偶联聚磷酸酯基药物载体用于喜树碱药物递释系统 通过开环聚合、点击反应以及酰胺化反应制备了CD147单抗靶向的还原响应性纳米粒子（CD147-PEG-b-PBYP-ss-CPT，缩写为CD147-CPTNPs）。首先制备还原响应性喜树碱衍生物（CPT-SS-N3），然后利用方酸二乙酯对α-氨基-ω-羟基聚乙二醇盐酸盐进行修饰，得到SAE-PEG-OH，进一步引发聚合磷酸酯单体BYP开环聚合。利用点击反应，在PBYP侧基键合CPT药物分子。利用核磁共振氢谱(1HNMR)、紫外光谱(UV-Vis)、高效液相色谱(HPLC)对SAE-PEG-b-PBYP-ss-CPT的结构进行表征。SAE-PEG-b-PBYP-ss-CPT可以在水溶液中自组装形成纳米粒子(CPT-loadedNPs)。利用PEG末端的方酸乙酯基与抗体氨基间的酰胺化反应，在纳米粒子表面偶联抗体(CD147-CPTNPs)。利用动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)观察CD147-CPTNPs和不含抗体的CPT-loadedNPs的粒径、粒径分布以及自组装形貌。X射线光电子能谱(XPS)的测试结果证实CD147单抗已成功结合在前药纳米粒子的表面。分别使用CD147低表达的HeLa和高表达的HepG2两种肿瘤细胞，测试了两种纳米粒子抑制肿瘤细胞增殖的能力，并通过活细胞工作站和流式细胞仪观察CD147-CPTNPs内吞结果，验证所制备的含单抗聚合物前药纳米粒子的靶向性。细胞内吞的结果表明表明，CD147-CPTNPs在HepG2细胞中具有比CPT-loadedNPs更高的累积量。本研究建立了一种将单克隆抗体与抗癌聚合物前药结合的新方法，并赋予可生物降解的聚合物前药以精确的靶向至肝癌细胞的功能。 2.CD147单克隆抗体偶联葡聚糖基药物载体用于阿霉素药物递释系统 葡聚糖(Dex)作为一种天然多糖，具有优异的生物相容性，明确的化学结构和众多的羟基，是PEG的类似物，可降低血浆蛋白的吸附，增加非特异性细胞摄取率，被认为是最理想、最安全的生物医用材料之一。在论文的第二部分，利用强氧化剂Nal04对葡聚糖进行氧化，得到侧链含有大量醛基（-CHO）的氧化葡聚糖(ODEX)，通过席夫碱反应连接阿霉素，合成含有酸敏感亚胺键的阿霉素前药。利用盐酸羟胺电位滴定测试了ODEX的醛基含量，并利用1HNMR、FT-IR、UV-Vis和HPLC对ODEX-DOX的结构进行表征。ODEX-DOX在自组装形成纳米粒子后，利用席夫碱反应偶联抗体，并通过DLS和TEM观察了这两种纳米粒子的粒径、粒径分布以及自组装形貌。最后通过MTT实验研究了纳米粒子的细胞毒性，并通过细胞内吞实验研究含CD147单抗的载药纳米粒子的靶向性。
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