摘要
目的:本研究通过对黔产红花龙胆野生资源的分布及生长环境、生长发育特性、种子生物学特性及播种育苗技术、环境因子和采收期对药材质量的影响、不同来源（野生、栽培、引种）药材质量评价进行研究，以期为红花龙胆野生变家种提供数据支持和参考依据。 方法:1.通过标本数据搜集、线路调查和样地调查对黔产红花龙胆资源分布情况及野外生长环境进行调查研究; 2.对人工栽培红花龙胆植株进行在圃跟踪观察，了解其物候规律及生长发育特性; 3.采用星点设计—响应面法优化TTC法快速测定红花龙胆种子生活力的条件;结合单因素与正交试验法研究温度、光照、基质以及浸种时间对红花龙胆种子萌发的影响，确定其适宜的萌发条件; 4.观察不同来源的红花龙胆种子的外观形态、种子净度、千粒重、含水量、生活力、发芽率等，分析种子的质量差异;观测不同播种基质、播种时间、播种深度对红花龙胆种子出苗情况的影响，初步建立红花龙胆种子播种育苗技术; 5.采用星点设计—响应面法优化红花龙胆中芒果苷、当药苷、马钱苷酸三个有效成分的提取工艺，建立红花龙胆一测多评含量测定方法;比较分析不同提取方法、溶剂、色谱条件对红花龙胆HPLC指纹图谱的影响，建立红花龙胆HPLC指纹图谱研究方法; 6.通过一测多评含量测定与指纹图谱研究相结合的方法，对11个不同产地红花龙胆药材进行质量评价并分析有效成分与环境因子的相关性;同时对不同采收期野生红花龙胆药材和不同来源（野生、引种、栽培）的红花龙胆药材进行质量评价。 结果:1.红花龙胆野生资源在贵州省内广泛分布，属于阳生植物，其生长环境主要为向阳的山坡草丛、灌丛;土壤呈中性偏弱碱性(pH=7.1～8.1)，以黄棕壤和石灰土等为主，生长环境中伴生植物主要为禾本科及菊科等低矮的植物。 2.通过对人工栽培红花龙胆植株在圃跟踪观察，确定红花龙胆从种子萌发到植株首次开花结果所需时间为2年，一年生植株仅形成莲座状基生叶，次年气温回升后出现抽梢展叶、现蕾及开花结果等生长现象;现蕾期从8月下旬开始持续约30天，开花期较长约为105天，果期约为75天，开花期与果期交叉重叠现象明显。 3.本研究建立了TTC法快速测定红花龙胆种子生活力方法（沿种子中线纵切种子，TTC浓度0.7％，染色温度40℃，染色时间7小时）和种子萌发条件（以滤纸为发芽床，12h光照/12h黑暗，20℃培养）。 4.10个产地红花龙胆种子的外观形态及质量指标，成熟红花龙胆种子呈淡褐色扁圆形，具种翅。种子长1.00～2.17mm，宽0.62～1.83mm，千粒重为0.099～0.1344g，净度为69.72～96.63％，含水量为7.61～9.33％，生活力为79～100％，发芽率为79～96％。相关性分析发现，红花龙胆种子含水量与种子发芽率及生活力均呈显著性正相关（P＜0.05），表明红花龙胆种子含水量对发芽率及生活力影响较大。 5.初步建立红花龙胆的播种育苗技术，其最佳播种基质为腐殖土∶黄壤∶珍珠岩(1∶1∶1)，播种期为3月末至4月中下旬，播种深度为0cm。 6.红花龙胆一测多评含量测定方法的最佳提取工艺(65％甲醇为溶剂，料液比为1∶50，超声提取40min);本研究建立了重复性好、稳定性高的红花龙胆药材HPLC指纹图谱研究方法。 7.评价分析11个产地的红花龙胆药材质量，以贵州省黔西县金坡乡煤洞厂村药材质量最佳，子对红花龙胆主要有效成分芒果苷影响最大的环境因为年均气温，其次为有机质和有效钾，速效磷较小。不同采收期药材质量研究表明，红花龙胆最佳采收期为8月份;比较不同来源（野生、栽培、引种）红花龙胆药材，其质量差异较小，主要有效成分芒果苷含量无显著性差异(P＞0.05)，表明本研究中栽培药材及引种药材均可入药使用。 结论:本课题通过对贵州省野生红花龙胆的资源调查统计，结合其生长发育特性、种子生物学特性，建立了播种育苗技术，并确定了最佳采收期，解决了栽培药材和引种药材均可入药使用的问题，为红花龙胆野生变家种提供了基础的理论指导，对后期规范化种植的试验研究提供数据支持。
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