摘要
目的:研究脂多糖（LPS）对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）凋亡的诱导作用，通过3D技术打印马鹿角粉复合生物支架材料，将其与小鼠骨髓来源巨噬细胞共培养，探讨此支架对LPS诱导的BMDMs凋亡的影响。 方法：体外分离培养Balb/c小鼠BMDMs后进行流式鉴定，设置不同浓度组的LPS（0、10、100、1000ng/ml）干预BMDMs，通过细胞流式凋亡检测确定最佳刺激浓度，检测相关炎性因子及凋亡因子评估干预效果。将3D打印的马鹿角粉支架材料与BMDMs共培养，实验分组为：空白组即完全培养基组细胞、对照组即最佳浓度LPS处理组细胞、实验组即3D打印支架材料浸提液与最佳浓度LPS共同处理组细胞，通过细胞的大体观察、CCK-8细胞毒性检测、细胞凋亡的流式检测、RT-PCR检测相关凋亡基因：TNF-α、Bax、Bcl-2的表达水平。 结果：①流式细胞术鉴定BMDMs表面特异性抗体F4/80阳性表达率为92.8%；②流式凋亡检测100ng/ml LPS对BMDMs的凋亡率作用明显，与对照组相比差异（P＜0.05）具有统计学意义；③RT-PCR检测结果显示与对照组相比，实验各组IL-1、IL-6、TNF-?、Bax、P53的表达量升高，差异均具有统计学意义（P＜0.01或P＜0.001）；④共培养后CCK-8结果显示，随时间增加，与空白组相比，支架材料浸提液与LPS共同处理组细胞和LPS处理组细胞的增殖活性降低，5天时，LPS组细胞降低趋势较其余两组显著下降，差异具有统计学意义（P＜0.01）；⑤细胞的大体形态观察，各组细胞形态差异明显，其中实验组较对照组细胞凋亡数量明显减少；⑥细胞凋亡检测表明与空白组相比，其余两组细胞凋亡率随时间增加而增加，5天时，实验组较对照组细胞凋亡率低，差异具有统计学意义（P＜0.01）；⑦PCR结果证明，随时间延长各组促凋亡基因TNF-α、Bax的表达呈上升趋势，而抑凋亡基因BCL-2的表达则呈下降趋势，与空白组相比，其余两组促凋亡基因TNF-α、Bax的表达增加，其中实验组基因表达低于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.01），其余两组抑凋亡基因BCL-2表达降低，而实验组明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。 结论：LPS可明显调控BMDMs的凋亡，能够促进细胞的凋亡；3D打印支架可在一定程度上降低LPS对BMDMs的促凋亡能力。
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