摘要
目的:探索高胆固醇血症在膀胱癌进展中发挥的作用。研究重点是探索高胆固醇血症所引起的膀胱癌细胞干性能力的改变。在作用机制方面，主要探索高胆固醇血症所引起的体内微环境成分如氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)水平改变与膀胱癌细胞干性能力的关系，为膀胱癌的诊断和治疗提供新的靶点。 方法:1）构建饮食诱导的小鼠高胆固醇血症模型，检测皮下膀胱癌细胞T24移植瘤生长能力差异，通过组织免疫组化、体外成球实验、流式Aldefluor试剂盒检测膀胱癌干性能力改变。2）在野生型B6小鼠及自发性高胆固醇血症LDLR-/-小鼠模型中，用BBN诱导原位膀胱癌的发生，比较原位膀胱癌进展差异、近端淋巴结转移和远处肺转移差异、小鼠预后的差别，通过免疫组化、免疫荧光双染判断BBN诱导后小鼠膀胱上皮细胞增殖能力及干性能力改变。3）以野生型B6小鼠及自发性高胆固醇血症LDLR-/-小鼠模型为对象，进行MB49鼠源膀胱癌细胞的皮下移植瘤种植和尾静脉注射肺转移模型构建，比较不同血胆固醇水平引起的移植瘤生长的差异及肺转移能力的差异，通过体内梯度稀释实验、组织免疫组化及体外成球实验检测膀胱癌干性能力的差异。4）通过正常小鼠（B6小鼠）血清及高胆固醇血症小鼠(LDLR-/-小鼠)血清培养膀胱癌细胞系T24、5637，通过MTT实验、Transwell侵袭实验检测增殖能力及侵袭能力差异，通过体外成球实验、Aldefluor流式试剂盒、CD44流式抗体、蛋白质印记检测膀胱癌干性能力改变。5）用低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)培养T24、5637，通过体外成球实验、Aldefluor流式试剂盒检测LDL-C对膀胱癌干性能力影响。用Elisa试剂盒检测高胆固醇血症小鼠血清ox-LDL水平，用ox-LDL培养T24、5637细胞，通过MTT实验、Transwell侵袭实验检测增殖能力及侵袭能力差异，通过体外成球实验、Aldefluor流式试剂盒、蛋白质印记检测膀胱癌干性能力改变。6）构建CD36稳定敲降T24细胞株，用ox-LDL培养细胞，通过MTT实验、Transwell侵袭实验检测增殖能力及侵袭能力差异，通过体外成球实验、Aldefluor流式试剂盒、蛋白质印记检测膀胱癌干性能力改变。 结果:1）饮食诱导的高胆固醇血症小鼠模型中膀胱癌皮下移植瘤生长较快，组织免疫组化，成球实验、Aldefluor流式实验显示高胆固醇血症小鼠皮下移植瘤来源的膀胱癌细胞干性能力增加。2）BBN诱导的原位膀胱癌在高胆固醇血症LDLR-/-小鼠模型中局部肿瘤级别进展更快并伴随更多的淋巴结及肺转移，小鼠的预后更差。免疫组化及免疫荧光双染显示BBN诱导后早期，LDLR-/-小鼠膀胱上皮细胞尤其是基底层有干性能力细胞大量活化增殖。3）MB49皮下移植瘤在LDLR-/-小鼠体内生长更快并发生肺部转移，尾静脉肺转移模型提示MB49在高胆固醇血症小鼠体内有更多的肺部转移。体内梯度稀释实验、免疫组化及体外成球实验显示高胆固醇血症小鼠模型能显著提高MB49干性能力。4）LDLR-/-小鼠血清刺激后能促进T24、5637增殖及侵袭能力，并能显著提高其干性能力。5）LDL并不能促进T24、5637的干性能力，而在高胆固醇血症小鼠血清中ox-LDL水平显著升高，ox-LDL能够浓度依赖性的引起T24、5637干性能力的增加，并促进其增殖与侵袭能力。6）T24细胞CD36的稳定敲降显著抑制ox-LDL所引起的干性能力增加，同时其增殖及侵袭能力也被抑制。 结论:高胆固醇血症能够促进膀胱癌的局部进展及远处转移，并能增强膀胱癌的干性能力。高胆固醇血症伴随有更高的血ox-LDL。而ox-LDL能够通过CD36引起膀胱癌细胞干性能力增加，并促进其增殖与侵袭转移能力。简而言之，高胆固醇血症通过ox-LDL/CD36轴引起膀胱癌细胞干性能力增加促进膀胱癌进程。
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