摘要
目的：PDGF-BB被认为是组织修复和再生的关键性调节因子，PDGF-BB可以促进干细胞为基础的骨再生，并且在调节骨组织重建、促进局部血管形成以及骨折愈合中起着重要的调节作用。然而PDGF-BB在体内的半衰期短，向体内反复多次注射价格昂贵，因此应用PDGF-BB需要一个较为合适的释控系统。本文使用不同浓度的rrPDGF-BB干预大鼠BMSCs，旨在研究rrPDGF-BB对大鼠BMSCs的成骨效果，并且研究其最佳干预浓度和干预时间。 方法：2019年10月至2021年02月，从SD大鼠体内提取BMSCs并培养，培养至第三代，使用CD45-PE-Cy抗体、CD34-PE抗体和CD29-PE抗体对大鼠BMSCs表面标志物进行鉴定，使用CCK-8法筛选rrPDGF-BB的最佳干预时间和最佳干预浓度，并在倒置显微镜下观察不同干预浓度的rrPDGF-BB在不同干预时间对大鼠BMSCs的影响；随后使用Ⅰ型胶原免疫荧光实验、碱性磷酸酶鉴定实验、茜素红染色实验验证最佳干预浓度对大鼠BMSCs的影响。将数据进行统计学分析，P＜0.05则证明差异有统计学意义。 结果：培养的大鼠BMSCs长势良好，第三代BMSCs低表达CD34（0.2%）和CD45（3.1%），高表达CD29（94.9%），细胞表面标志物符合国际细胞治疗委员会提出BMSCs的鉴定标准。随后使用不同浓度的rrPDGF-BB干预大鼠BMSCs，不同时间点在倒置显微镜下观察细胞，发现rrPDGF-BB可以使大鼠BMSCs发生细胞形态学变化。使用12.5μg/L的rrPDGF-BB干预大鼠BMSCs时，细胞增殖较少，发生形态改变的细胞并不多；使用50μg/L和100μg/L的rrPDGF-BB干预大鼠BMSCs时，细胞发生形态改变，但是大量细胞死亡；使用25μg/L的rrPDGF-BB干预大鼠BMSCs时，干预第三天，多数细胞发生形态改变，呈细长条形，细胞伪足变成细长拉丝，部分细胞形成环状结构；干预第五天，细胞少量生长，发生形态改变的细胞少量增加。总体来说rrPDGF-BB浓度在25μg/L时对细胞影响最大，实验达到预期效果。同时使用CCK-8法筛选rrPDGF-BB的最佳干预时间和最佳干预浓度，结果表明使用浓度为25μg/L的rrPDGF-BB干预细胞3天效果最好，细胞增殖明显。随后使用浓度为25μg/L的rrPDGF-BB诱导大鼠BMSCs3天，并使用Ⅰ型胶原免疫荧光染色、碱性磷酸酶染色、茜素红染色鉴定诱导的大鼠BMSCs，结果表明：25μg/L的rrPDGF-BB对大鼠BMSCs有良好的成骨诱导作用。 结论：研究表明浓度为25μg/L的rrPDGF-BB干预大鼠BMSCs3天，大鼠BMSCs形态改变明显，并且25μg/L的rrPDGF-BB对大鼠BMSCs有良好的成骨诱导能力。
NETL