摘要
人源蛋白质酪氨酸磷酸酶PTP-PEST由PTPN12基因编码，其表达或者活性的异常与多种疾病密切相关。但关于PTP-PEST功能及PTP-PEST对恶性肿瘤的发生发展，特别是对宫颈癌的研究报道仍相当有限。 本研究应用课题组前期构建的PX458-PTPN12-sgRNA1和PX459-PTPN12-sgRNA2重组载体共转染HeLa细胞，经过筛选、鉴定后获得了PTPN12基因敲除的HeLa稳定细胞株。采用悬滴实验，观察敲除PTPN12基因对HeLa细胞间相互作用的影响，结果表明，与野生型细胞相比，PTP-PEST的缺失减弱了细胞间粘附性，并对细胞的增殖有一定的促进作用；吉姆萨染色结果显示，PTP-PEST的缺失使得处于分裂期的HeLa细胞数量显著增加；采用流式细胞术对细胞周期进行分析，发现PTP-PEST缺失的HeLa细胞株处于S期的细胞数量显著增加，表明PTPN12基因的敲除促进了细胞的体外增殖；通过细胞划痕和Transwell细胞侵袭实验，发现PTP-PEST缺失的HeLa细胞的迁移能力和侵袭能力显著增强；软琼脂克隆形成实验结果表明，PTP-PEST的缺失对HeLa细胞的克隆形成能力无显著影响；小鼠荷瘤实验结果也显示，PTPN12基因敲除后的HeLa细胞的体内成瘤能力并没有显著提高；值得注意的是，与接种野生型HeLa细胞小鼠的脾脏相比，接种PTPN12基因敲除细胞的小鼠脾脏显著增大；通过HE染色发现，肿瘤组织内部无明显差异，但是PTPN12基因敲除细胞接种组的小鼠脾脏中多核巨细胞的数量显著增加，说明PTP-PEST缺失的HeLa细胞可能使小鼠炎症反应加重；最后应用Western Blot技术，发现PTP-PEST与pERK、FAK和E-cadherin信号通路密切相关，提示PTP-PEST可能影响细胞粘附和细胞迁移的过程，后续还需要对肿瘤体内转移能力进行研究。 综上所述，成功构建了PTPN12基因敲除的HeLa稳定细胞株，并对细胞株进行了表征。体外实验结果表明，PTP-PEST的缺失提高了HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭的能力，对克隆形成能力无显著影响，体内成瘤能力也未见明显差异。本研究初步揭示了PTP-PEST在HeLa细胞中的影响，为研究PTP-PEST在肿瘤细胞中的生物功能，提供了一种有价值的细胞模型。
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