摘要
研究背景及目的：清肺愈痤方为本人导师杨柳教授根据多年临床经验所创立的，结合了岭南地区气候环境，用于治疗寻常性痤疮的经验方，方含黄芩15g、赤芍15g、枇杷叶15g等，具有清热燥湿，消瘀散结的功效。为方便患者服用，本课题前期对清肺愈痤方的剂型进行改进，进行了颗粒剂制剂工艺研究。为给清肺愈痤方及其颗粒制剂的质量控制提供依据，本研究拟建立测定清肺愈痤颗粒中黄芩苷、丹参酮ⅡA含量检测方法，并完成其方法学验证。同时对清肺愈痤颗粒中的黄芩、丹参、赤芍进行定性鉴别，考察其影响因素。为明确清肺愈痤颗粒治疗痤疮的作用机制，为新药开发提供依据，对本方提取物进行抗炎及免疫调节作用研究。 研究方法：本课题用薄层色谱法对清肺愈痤颗粒中黄芩、丹参、赤芍进行定性鉴别，对影响薄层层析结果的因素进行考察。用高效液相色谱法并对黄芩苷含量、丹参酮ⅡA含量进行检测，并从专属性、精密度、重复性、稳定性等几方面对方法学的考察。根据前期研究得到的最佳提取纯化工艺制备清肺愈痤颗粒中间体，采用冰醋酸致腹腔毛细血管渗出增加小鼠模型、棉球肉芽肿大鼠模型、环磷酰胺致免疫力低下小鼠模型对其进行抗炎和免疫调节作用研究。 研究结果：黄芩的定性鉴别采用的薄层展开剂为乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶3∶1∶1)，点样量为15μL，室温饱和30min后展开，喷以1％的三氯化铁乙醇溶液显色。丹参的定性鉴别采用的薄层展开剂为石油醚-乙酸乙酯(5∶1)，点样量为15μL，室温饱和30min后展开。赤芍的定性鉴别采用的薄层展开剂为乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)，点样量为15μL，室温饱和60min后展开，喷以5％香兰素硫酸溶液，再置于105℃烘箱中加热3min显色。黄芩苷定量检测方法采用的色谱条件为流动相：甲醇-0.376％磷酸溶液(47∶53);流速：1.0mL·min-1;柱温：25℃;检测波长：280nm;进样量：10μL。丹参酮ⅡA含量的定量检测方法为采用的色谱条件为流动相：乙腈-0.02％磷酸溶液，按照2015年版《中国药典》中测定丹参酮ⅡA的方式梯度洗脱;流速为1mL·min-1;柱温为20℃;检测波长270nm，进样量10μL。 药效学试验结果示，清肺愈痤颗粒各剂量组对小鼠腹腔清洗液OD值未见明显改变作用;清肺愈痤颗粒各剂量组棉球肉芽肿湿重、干重与模型组相比均未见明显改变;清肺愈痤颗粒中、高剂量可明显升高模型动物的吞噬指数;清肺愈痤颗粒中、高剂量组使血清溶血素OD值降低。 研究结论：薄层色谱鉴定中，斑点均清晰整齐，分离度好，且方法简便，可用于清肺愈痤颗粒中黄芩、丹参、赤芍的定性鉴别。所建立的含量检测方法简便快捷，样品中黄芩苷、丹参酮ⅡA峰形良好，且方法学评价除丹参酮ⅡA回收率均符合要求。药效学结果示清肺愈痤颗粒的抗急性渗出性炎症、抗慢性增生性炎症作用较弱，中、高剂量组对环磷酰胺诱发的小鼠非特异性免疫降低具有明显的改善作用，对小鼠的特异性体液免疫有抑制作用，具体机制需作进一步研究。
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